Determinación de la potencia de vacunas por ensayos in vivo e in vitro

Fundamento

Históricamente la potencia se determina por ensayo biológico en animales: grupos de animales reciben diluciones del producto y del patrón de referencia internacional, y tras un período se los desafía con el agente o se les mide la respuesta serológica; con la proporción de animales protegidos o con los títulos de anticuerpos se calcula por análisis estadístico de rectas paralelas la potencia relativa del producto respecto del patrón, con su intervalo de confianza, que debe caer dentro de los límites especificados. Estos ensayos son caros, lentos y usan muchos animales, y por eso la tendencia normativa es reemplazarlos. Las alternativas in vitro determinan la cantidad de antígeno funcional y no simplemente presente: el inmunoensayo con anticuerpos que reconocen específicamente el epítopo protector, la citometría o el ensayo de unión a receptor, y en toxoides los métodos que miden la capacidad de unión a anticuerpos neutralizantes. Cada método alternativo debe validarse demostrando su correlación con el ensayo in vivo y con la protección, y su aceptación es producto por producto. En vacunas a virus vivo la potencia se expresa como título infectivo determinado por cultivo celular o en huevos embrionados, con lectura por efecto citopático o por inmunofluorescencia. El resultado siempre se informa contra un patrón de referencia trazable y con su intervalo de confianza, sin el cual el número no significa nada.

Matriz (en qué muestra)

Vacunas bacterianas y virales de uso humano y veterinario; vacunas combinadas; toxoides tetánico y diftérico; vacunas a virus inactivado y atenuado; vacunas de subunidades; lotes de producción y de estabilidad

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Bioterio con las condiciones de bienestar animal y bioseguridad requeridas; cabinas de bioseguridad; incubadoras de cultivo celular; lector de microplacas; citómetro de flujo; microscopio invertido; centrífuga refrigerada; programa de análisis estadístico de ensayos biológicos.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Patrones internacionales o nacionales de referencia; líneas celulares certificadas y sus medios; anticuerpos específicos; juegos de inmunoensayo; medios de cultivo y sueros; cepas de desafío cuando corresponde.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas de cultivo y microplacas; material de inoculación; jaulas y accesorios de bioterio; tubos y crioviales; pipetas serológicas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Medios y sueros; placas y puntas; guantes; animales de experimentación cuando el método lo exige; reactivos de inmunoensayo.

Unidad

kat · potencia relativa frente al patrón con su intervalo de confianza · unidades internacionales por dosis · título infectivo (log DICC50/dosis) · contenido de antígeno funcional (µg/dosis)

Rango de referencia

Cada monografía fija el intervalo de potencia aceptable, en general expresado como un mínimo por dosis y con el requisito de que el límite inferior del intervalo de confianza lo supere; la potencia debe mantenerse hasta el vencimiento

Norma que lo exige

La Farmacopea Argentina, en las monografías de vacunas y en el capítulo de ensayos biológicos y de análisis estadístico de ensayos biológicos; las disposiciones de la autoridad regulatoria nacional sobre liberación de lotes de productos biológicos, que exige el control estatal previo; los requisitos de precalificación y las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud para vacunas; las normas de bienestar animal y de reemplazo, reducción y refinamiento del uso de animalesnorma argentina

Norma que describe la técnica

La Farmacopea Argentina y las farmacopeas de referencia en sus monografías de vacunas y en los capítulos de ensayos biológicos, de análisis estadístico de resultados de ensayos biológicos y de métodos alternativos; las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud sobre requisitos para vacunas; las guías internacionales sobre validación de métodos in vitro sustitutivos de ensayos en animalesnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopea Argentina y farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes; recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Se necesitan varias dosis por dilución y por grupo, y suficientes viales del lote para todo el diseño estadístico

Conservación y transporte

La cadena de frío es el punto crítico absoluto: las vacunas se transportan y se guardan entre 2 y 8 °C con registro continuo, y las que se congelan pierden potencia de manera irreversible por desorción del antígeno del adyuvante, aunque después se vean normales. Se descarta todo vial con evidencia de congelación. Los patrones de referencia se conservan según su ficha, en general liofilizados y a temperatura muy baja, y se reconstituyen en el momento. El diseño del ensayo, incluidos el número de animales o de réplicas y las diluciones, se respeta tal como está validado, porque el cálculo estadístico depende de él.

Límite de detección típico

No aplica: se informa potencia relativa con su intervalo de confianza

Incertidumbre típica

Los ensayos biológicos in vivo tienen intervalos de confianza amplios, con frecuencia de un factor de 1,5 a 2; los métodos in vitro validados reducen esa dispersión de manera notable

Área

Farmacéutico; Microbiología

Fecha de última actualización: 10/9/2026