Hemoderivados: actividad de factores de la coagulación y pureza específica

Fundamento

La actividad de los factores se determina por ensayos funcionales que reproducen la cascada de la coagulación. El método de una etapa mide el tiempo de coagulación de un plasma deficiente en el factor de interés al que se le agrega la muestra, comparado con una curva construida con el patrón internacional; es rápido y es el que más se usa en clínica. El método cromogénico de dos etapas usa sustratos sintéticos que liberan un cromóforo cuando el factor activado actúa, y da resultados más específicos y menos dependientes del plasma reactivo, por lo que es el preferido en el control de producto. Los dos métodos pueden dar resultados distintos en factores modificados, y por eso la monografía y el registro definen cuál aplica. El contenido proteico total se determina por métodos colorimétricos o por absorbancia en el ultravioleta, y la relación entre actividad y proteína da la actividad específica, que es la medida de pureza del concentrado: dos productos con la misma potencia pueden tener cargas proteicas muy distintas. La composición proteica se analiza por electroforesis y por cromatografía de exclusión, que revela agregados y fragmentos. Se determinan además los marcadores de seguridad viral del plasma de partida y del granel por métodos moleculares, la ausencia de anticuerpos indeseados, los residuos de los agentes de inactivación viral y los ensayos de esterilidad, endotoxinas y estabilidad tras la reconstitución.

Matriz (en qué muestra)

Concentrados de factor VIII y de factor IX; complejo protrombínico; fibrinógeno y sellantes de fibrina; plasma para fraccionamiento; productos de terapia sustitutiva; lotes de producción y de estabilidad

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Coagulómetro automático; lector de microplacas con control de temperatura; equipo de electroforesis; cromatógrafo de exclusión molecular; termociclador en tiempo real para marcadores virales; espectrofotómetro; centrífuga refrigerada; equipo de esterilidad y de endotoxinas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Patrones internacionales de cada factor; plasmas deficientes; reactivos de tromboplastina y de cefalina; sustratos cromogénicos; juegos moleculares de marcadores virales; reactivos de electroforesis; lisado de amebocitos.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas y microplacas de coagulación; tubos de reacción; geles; viales; material libre de endotoxinas; micropipetas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos y patrones; cubetas y placas; guantes; geles.

Unidad

kat · actividad por vial (UI) y por mililitro reconstituido · actividad específica (UI/mg de proteína) · proteína total (mg/mL) · agregados y fragmentos (%) · marcadores virales no detectados

Rango de referencia

La actividad hallada debe alcanzar la declarada en el vial dentro del intervalo de la monografía, en general con un mínimo y un máximo alrededor del nominal; la actividad específica se especifica por producto y separa los concentrados de pureza intermedia de los de alta pureza

Norma que lo exige

La Farmacopea Argentina, en las monografías de hemoderivados y en los capítulos de ensayos biológicos, esterilidad y endotoxinas; la ley de sangre y sus reglamentaciones y las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre productos derivados de plasma humano, incluida la liberación estatal de lotes; las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud sobre plasma para fraccionamiento; las buenas prácticas de fabricación de hemoderivadosnorma argentina

Norma que describe la técnica

La Farmacopea Argentina y las farmacopeas de referencia en sus monografías de concentrados de factores de la coagulación, albúmina e inmunoglobulinas, con los métodos de valoración funcional; las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud sobre requisitos de hemoderivados y sobre patrones internacionales; las guías sobre seguridad viral del plasmanorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopea Argentina y farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes; recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Se necesitan varios viales del lote para el ensayo y sus réplicas

Conservación y transporte

Los productos se guardan a la temperatura declarada, en general refrigerados o congelados, y las muestras se descongelan una sola vez y de manera controlada, porque cada ciclo de congelación y descongelación destruye actividad de manera irreversible; se registra el número de ciclos. Las soluciones reconstituidas se ensayan de inmediato. Los plasmas reactivos y los sustratos se manejan según su ficha y se controlan con un plasma de control en cada serie. Todo el material que interviene se maneja como material biológico con riesgo, con las precauciones de bioseguridad correspondientes, y se conservan muestras de retención del lote.

Límite de detección típico

Los ensayos funcionales resuelven actividades desde fracciones de unidad internacional por mililitro

Incertidumbre típica

Del orden del 10 al 20 % relativo en los ensayos funcionales, motivo por el cual se informan con su intervalo de confianza

Área

Farmacéutico; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 10/9/2026