Heparinas: potencia anticoagulante, identidad estructural y contaminantes

Fundamento

La potencia anticoagulante se determina por ensayos funcionales sobre plasma o sobre sistemas purificados, contra el patrón internacional: los métodos actuales miden la actividad de inhibición de los factores de la coagulación mediada por antitrombina, con sustratos cromogénicos que liberan un compuesto coloreado proporcional a la actividad residual del factor, y se informa la potencia en unidades internacionales por miligramo con su intervalo de confianza; en heparinas de bajo peso molecular se determinan por separado las actividades sobre los dos factores y su relación, que es lo que define el producto. La identidad estructural se establece por resonancia magnética nuclear de protón, que da un espectro característico donde el contaminante sobresulfatado aparece como señales adicionales inconfundibles, y por electroforesis capilar o cromatografía de intercambio aniónico con detección específica, ambos incorporados a las farmacopeas después del episodio de contaminación. La distribución de pesos moleculares se determina por cromatografía de exclusión molecular con calibración específica y define la clase de heparina. Se completa con la determinación de nitrógeno, sodio y sulfato, con el ensayo de proteínas y ácidos nucleicos residuales, con la búsqueda de otros glicosaminoglicanos por métodos enzimáticos, y con los ensayos de esterilidad y endotoxinas del producto terminado. La trazabilidad del origen animal y la certificación frente al riesgo de encefalopatías espongiformes forman parte del expediente.

Matriz (en qué muestra)

Heparina sódica y cálcica no fraccionada; heparinas de bajo peso molecular; materia prima de origen porcino y bovino; jeringas prellenadas de heparina; soluciones de lavado de catéteres; graneles importados

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Espectrofotómetro con lector de microplacas y control de temperatura; coagulómetro; espectrómetro de resonancia magnética nuclear; equipo de electroforesis capilar; cromatógrafo de exclusión molecular; equipo de cromatografía de intercambio aniónico; espectrómetro de plasma; lector de endotoxinas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Patrón internacional de heparina; sustratos cromogénicos y factores de la coagulación; antitrombina; agua deuterada y patrones de resonancia; patrones de calibración de peso molecular; enzimas específicas de glicosaminoglicanos; lisado de amebocitos.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Microplacas; tubos de resonancia; capilares de electroforesis; columnas de exclusión; viales; material libre de endotoxinas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos y patrones; microplacas; capilares; guantes; agua deuterada.

Unidad

kat · unidades internacionales por miligramo con intervalo de confianza · relación de actividades sobre los dos factores · peso molecular promedio y distribución (Da) · conformidad del espectro de resonancia · contaminantes detectados

Rango de referencia

Las monografías fijan un mínimo de unidades internacionales por miligramo para la heparina no fraccionada y ventanas de peso molecular y de relación de actividades para cada heparina de bajo peso molecular; el contaminante sobresulfatado debe estar ausente

Norma que lo exige

La Farmacopea Argentina, en las monografías de heparina sódica, heparina cálcica y heparinas de bajo peso molecular, con sus ensayos de potencia, identidad y pureza; las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre productos de origen biológico y sobre trazabilidad del origen animal; las guías internacionales sobre riesgo de encefalopatías espongiformes transmisibles; las buenas prácticas de fabricaciónnorma argentina

Norma que describe la técnica

La Farmacopea Argentina y las farmacopeas de referencia en sus monografías de heparinas, con los ensayos de potencia anticoagulante por método cromogénico, identidad por resonancia magnética nuclear y por electroforesis capilar, y distribución de pesos moleculares; las guías de las agencias regulatorias emitidas tras el episodio de contaminación; las normas sobre materiales de origen animalnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopea Argentina y farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes; guías regulatorias sobre heparinas vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. De 50 a 200 mg de materia prima o varios envases de producto terminado

Conservación y transporte

La materia prima se guarda seca y cerrada; es higroscópica y la humedad afecta la valoración expresada sobre base seca. Las soluciones para el ensayo funcional se preparan frescas y se mantienen en frío, porque la actividad decae. Los reactivos biológicos —antitrombina, factores, sustratos— se guardan según su ficha y se descartan al vencimiento, ya que un reactivo degradado da potencias bajas y se atribuye erróneamente al producto. Se archiva la documentación de trazabilidad del origen animal junto con los resultados, dado que forma parte del criterio de aceptación tanto como el análisis.

Límite de detección típico

El espectro de resonancia detecta el contaminante sobresulfatado desde el orden del 0,1 al 1 % de la muestra

Incertidumbre típica

Los ensayos de potencia tienen intervalos de confianza del orden del 10 al 20 %; la identidad estructural es categórica

Área

Farmacéutico; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 10/9/2026