Huella cromatográfica de extractos vegetales y comparación entre lotes

Fundamento

Se desarrolla un método cromatográfico que separe la mayor cantidad posible de componentes en una corrida razonable, en general cromatografía líquida de fase reversa con gradiente y detección por arreglo de diodos, y opcionalmente acoplada a espectrometría de masas para la identificación; también se usa cromatografía en capa delgada de alto rendimiento con densitometría, que da una imagen del perfil muy comunicativa y es más barata. El extracto se prepara siempre con el mismo procedimiento, se filtra y se inyecta junto con una solución del material de referencia auténtico y con un patrón interno o un marcador que sirva de referencia de tiempo de retención. El cromatograma resultante se compara con el de referencia por varios criterios: presencia de todos los picos característicos, ausencia de picos extraños, y similitud del perfil evaluada por métodos numéricos —correlación entre vectores de intensidades, ángulo coseno, o análisis de componentes principales sobre un conjunto de lotes— que reducen el perfil a uno o dos números comparables contra un umbral. Para que la comparación tenga sentido hace falta una base de lotes auténticos que defina la variabilidad natural, que en material vegetal es grande y depende de la cosecha, del suelo y del año; sin esa base, cualquier diferencia parece significativa.

Analito (qué se mide)

Perfil cromatográfico completo del extracto y su comparación con el de referencia

Matriz (en qué muestra)

Extractos secos, blandos y fluidos; tinturas; fitoterápicos terminados; drogas vegetales de distintos orígenes; lotes de proveedores diferentes; productos en investigación de calidad

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con arreglo de diodos y acoplado a espectrometría de masas; equipo de cromatografía en capa delgada de alto rendimiento con aplicador automático y densitómetro; baño de ultrasonido; centrífuga; balanza analítica; programa de análisis multivariado.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Solventes de calidad cromatográfica; patrones de los marcadores; materiales de referencia auténticos de la especie; solución amortiguadora y modificadores de fase móvil; agua de calidad cromatográfica.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Matraces aforados; filtros de membrana; viales de inyección; placas de capa delgada de alto rendimiento; columnas de fase reversa; jeringas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Solventes; filtros y viales; placas; guantes; columnas.

Unidad

1 · número de picos característicos presentes · tiempos de retención relativos · índice de similitud con el perfil de referencia · resultado del análisis multivariado · picos extraños detectados

Rango de referencia

El umbral de similitud se define en el desarrollo del método a partir de la variabilidad de un conjunto de lotes auténticos, y suele exigirse un índice por encima de 0,90 sobre una escala de cero a uno

Norma que lo exige

Las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre registro y control de productos fitoterápicos, que exigen la caracterización del extracto y la demostración de consistencia entre lotes; la Farmacopea Argentina en sus monografías de extractos y en el capítulo de métodos cromatográficos; las buenas prácticas de fabricación de fitoterápicos; las directrices internacionales sobre calidad de medicamentos herbariosnorma argentina

Norma que describe la técnica

Las directrices de la Organización Mundial de la Salud y de las agencias regulatorias sobre huella cromatográfica de medicamentos herbarios; los capítulos de las farmacopeas de referencia sobre extractos y sobre métodos cromatográficos; las monografías de extractos vegetales de las farmacopeas, que incluyen cromatogramas de referencia; los métodos quimiométricos de comparación de perfilesnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopea Argentina y farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes; directrices internacionales sobre medicamentos herbarios vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. De 0,5 a 5 g de extracto o de droga por preparación

Conservación y transporte

El extracto se guarda cerrado, en frío y al abrigo de la luz, porque los polifenoles se oxidan y el perfil cambia; una muestra guardada meses en el escritorio ya no se parece a sí misma. La preparación se hace siempre con el mismo solvente, la misma concentración y el mismo tiempo de sonicado, dado que cualquier variación mueve las proporciones relativas y arruina la comparación. Las soluciones se inyectan el mismo día. Se corre el material de referencia en la misma secuencia y se verifica la estabilidad del sistema con inyecciones repetidas. Se archivan los cromatogramas y los datos crudos, que son el registro de la identidad del lote.

Límite de detección típico

El método detecta componentes presentes desde el orden del 0,05 al 0,1 % del extracto

Incertidumbre típica

Los índices de similitud tienen una dispersión propia que se establece con lotes auténticos y que define el umbral; los tiempos de retención relativos son muy reproducibles

Área

Farmacéutico; Química analítica

Fecha de última actualización: 10/9/2026