Identificación de especies medicinales por código de barras de ADN y detección de sustitución

Fundamento

Se extrae ADN del material con protocolos adaptados a matrices vegetales ricas en polifenoles y polisacáridos, que inhiben las reacciones posteriores y obligan a pasos de limpieza adicionales. Sobre ese ADN se amplifican por reacción en cadena de la polimerasa los marcadores aceptados como código de barras vegetal: regiones de plastidio y el espaciador interno transcripto del ADN ribosomal, que es el que mejor discrimina entre especies cercanas en plantas medicinales. Los productos se secuencian y las secuencias se comparan con bases de datos curadas, aceptando la identificación cuando la identidad supera un umbral y la distancia con la especie más cercana es suficiente. En mezclas y en productos con varias especies declaradas la secuenciación clásica no sirve porque devuelve una lectura superpuesta, y se usa secuenciación de nueva generación sobre el conjunto amplificado, que da la lista de especies presentes y su proporción de lecturas, o reacciones en tiempo real específicas para la especie declarada y para las sustitutas más frecuentes, que son rápidas y baratas para tamizaje. La limitación del método es real y se informa: los extractos muy procesados y los sometidos a solventes agresivos pueden tener el ADN degradado hasta el punto de no amplificar, y un resultado negativo en ese caso no prueba ausencia sino imposibilidad de análisis.

Analito (qué se mide)

Especies vegetales presentes por marcadores de ADN y detección de sustituciones y de mezclas

Matriz (en qué muestra)

Drogas vegetales pulverizadas; extractos y tinturas; cápsulas y comprimidos de fitoterápicos; mezclas de hierbas; suplementos herbarios importados; muestras de fiscalización

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador convencional y en tiempo real; equipo de electroforesis y sistema de documentación; equipo o servicio de secuenciación, incluida la de nueva generación; centrífuga refrigerada; campana de flujo laminar; molino criogénico; espectrofotómetro para cuantificar ADN.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Juegos de extracción de ADN vegetal con eliminación de polifenoles; mezclas de amplificación con cebadores de los marcadores; reactivos de purificación y de secuenciación; controles positivos de especies auténticas; agua libre de nucleasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos de reacción; micropipetas con puntas con filtro; morteros y material de molienda dedicado; geles y cubas; gradillas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos moleculares; puntas con filtro; tubos; guantes; geles.

Unidad

1 · especie identificada y porcentaje de identidad de la secuencia · marcador utilizado · especies detectadas en la mezcla y su proporción de lecturas (%) · calidad e integridad del ADN extraído

Rango de referencia

La identificación se acepta cuando la identidad de la secuencia con la referencia supera el umbral definido y la separa con claridad de la especie más próxima; en mezclas se informa la lista de especies con su proporción de lecturas, que no equivale a proporción en masa

Norma que lo exige

Las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre registro y control de fitoterápicos y de suplementos con extractos vegetales, que exigen la identificación de la especie; la Farmacopea Argentina en sus monografías de drogas vegetales; las buenas prácticas de fabricación; los requisitos de los mercados de destino y los protocolos de fiscalizaciónnorma argentina

Norma que describe la técnica

Los protocolos internacionales de código de barras de ADN para plantas y sus marcadores de referencia; los capítulos de las farmacopeas de referencia sobre identificación de drogas vegetales por métodos moleculares; las directrices sobre autenticación de productos herbarios; los métodos de secuenciación de nueva generación aplicados a mezclas vegetalesnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Protocolos de código de barras de ADN vigentes; farmacopeas de referencia y directrices sobre fitoterápicos vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Unos pocos cientos de miligramos de material alcanzan para la extracción

Conservación y transporte

La molienda se hace con material dedicado y descontaminado entre muestras, porque en un laboratorio que analiza plantas la contaminación cruzada es el riesgo principal y basta con una traza para invalidar una identificación. Se trabaja con áreas separadas para extracción, preparación de la mezcla y amplificación, con controles negativos en cada tanda. El material se guarda seco y en frío; los extractos se guardan congelados. Se corren controles de especies auténticas y, cuando se informa ausencia, se documenta la calidad del ADN extraído para poder distinguir una ausencia real de una falla de amplificación.

Límite de detección típico

Detecta la especie desde cantidades muy pequeñas de material; en mezclas resuelve componentes desde el orden del 1 al 5 %

Incertidumbre típica

El resultado se informa como identificación con su porcentaje de identidad y su marcador; las proporciones en mezclas son semicuantitativas y se declaran como tales

Área

Farmacéutico; Biología molecular

Fecha de última actualización: 10/9/2026