Monómero en biofármacos por exclusión molecular y dispersión de luz

Fundamento

La cromatografía de exclusión molecular separa por tamaño: las moléculas grandes no entran en los poros de la columna y salen primero, las chicas se demoran. El detector ultravioleta da la proporción de cada especie como porcentaje del área total. El punto delicado es la fase móvil: si la proteína interactúa con la columna, el perfil cambia, de modo que la composición del amortiguador es parte del método y se verifica con el material de referencia del producto. La dispersión de luz multiángulo acoplada en línea agrega lo que la exclusión sola no da: la masa molar absoluta de cada pico, sin depender de la calibración con patrones ni de la forma de la molécula.

Analito (qué se busca)

Monómero

Matriz (en qué muestra)

Anticuerpos monoclonales y proteínas de fusión; proteínas recombinantes terapéuticas; formulaciones liofilizadas y líquidas; muestras de estabilidad y de estrés; graneles y producto terminado; biosimilares en desarrollo

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con columna de exclusión molecular y detectores ultravioleta y de dispersión de luz multiángulo; equipo de filtración; centrífuga.

Proveedores de Filtración y purificación de agua · Centrífugas · Cromatografía líquida (HPLC/UPLC).

Reactivos¿Dónde lo compro?

Fases móviles con solución amortiguadora y sales; patrones de calibración de masa molar; material de referencia del producto; agua libre de partículas.

Proveedores de Metrología y calibración · Patrones y materiales de referencia.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Columnas de exclusión; celdas de dispersión; celdas de ultracentrífuga; viales libres de partículas; jeringas y filtros validados.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Fases móviles y patrones; columnas; viales; guantes; filtros.

Unidad

kg/kg · monómero, dímero y agregados (% del área) · masa molar absoluta de cada especie (kDa) · índice de polidispersidad · partículas por mililitro por rango de tamaño · morfología de las partículas contadas

Rango de referencia

Se informa como porcentaje del área total; la especificación fija un mínimo que el producto debe mantener durante toda su vida útil

Norma que lo exige

Las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre productos biotecnológicos y sobre su expediente de registro; la Farmacopea Argentina en sus capítulos de partículas en inyectables y de métodos cromatográficos; las guías internacionales armonizadas sobre especificaciones y sobre estabilidad de productos biotecnológicos; las guías sobre inmunogenicidad y sobre partículas subvisibles en productos proteicosnorma argentina

Norma que describe la técnica

Los capítulos de las farmacopeas de referencia sobre cromatografía de exclusión molecular, sobre partículas subvisibles en inyectables y sobre métodos para agregados en productos proteicos; las guías internacionales armonizadas sobre pruebas de especificaciones de productos biotecnológicos; las guías de las agencias sobre caracterización de agregados y su relación con la inmunogenicidadnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes; guías internacionales armonizadas sobre productos biotecnológicos vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. De 0,5 a 5 mL de producto según las técnicas empleadas

Conservación y transporte

La muestra se manipula con cuidado extremo porque el propio manejo genera agregados: no se agita, no se hace espuma, no se pipetea con fuerza y no se congela y descongela salvo que sea parte del diseño; cada ciclo se registra. Se guarda a la temperatura declarada y se lleva a temperatura de ensayo de manera suave. El material debe estar libre de partículas y no se usan filtros salvo que estén validados para el producto, ya que retienen agregados y esconden justamente lo que se busca. Se corre un control de referencia del propio producto en cada serie para verificar que el sistema no esté generando o perdiendo agregados.

Límite de detección típico

La exclusión molecular resuelve especies desde el 0,05 % del área; el conteo de partículas detecta desde 1 a 2 µm

Incertidumbre típica

Del orden del 5 al 10 % relativo en los porcentajes de especies y del 20 al 30 % en el conteo de partículas subvisibles

Área

Farmacéutico; Biología molecular

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 3825 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos