Partículas subvisibles por oscurecimiento de luz y por microscopía, y partículas visibles en inyectables

Fundamento

En el método de oscurecimiento de luz, un volumen de la solución pasa por una celda de flujo atravesada por un haz láser; cada partícula que cruza el haz proyecta una sombra sobre el detector y la caída de señal se convierte en un diámetro equivalente, calibrado con esferas de látex de tamaño certificado. Se hacen cuatro lecturas de la muestra o de un conjunto de envases reunidos, se descarta la primera y se promedian las otras, y se informa el número de partículas mayores a 10 y a 25 micrones por envase o por mililitro, en un ambiente de partículas controlado y con blancos de agua libre de partículas que verifican que el sistema no aporta. El método microscópico se usa cuando la solución es viscosa, coloreada, con burbujas o con emulsiones que el láser no puede leer: la muestra se filtra sobre una membrana reticulada, se seca y se cuentan al microscopio, con iluminación oblicua y a 100 aumentos, las partículas mayores a 10 y 25 micrones sobre un retículo calibrado. Para las partículas visibles, cada envase se inspecciona a ojo contra un fondo negro y uno blanco, bajo iluminación de intensidad fijada, con un movimiento de rotación suave durante un tiempo fijo, por inspectores calificados con juegos de envases con partículas patrón; los sistemas automáticos con cámaras hacen lo mismo en las líneas de producción. Los recuentos de los biofármacos se complementan con métodos de imagen de flujo que además muestran la forma de las partículas y distinguen proteína de burbujas y de siliconas.

Matriz (en qué muestra)

Inyectables de pequeño y gran volumen; soluciones oftálmicas; productos biológicos y proteínas terapéuticas; polvos para reconstituir

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Contador de partículas por oscurecimiento de luz con sensor calibrado y muestreador; microscopio binocular con iluminación oblicua y episcópica, retículo calibrado y platina; equipo de filtración con membranas reticuladas en cabina de flujo laminar; cabina de inspección visual con fondos negro y blanco y luxómetro; para biofármacos, analizador de imagen de flujo.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Esferas de látex de calibración certificadas de 10, 15 y 25 micrones; agua libre de partículas; patrones de conteo para la verificación del sistema; detergente libre de partículas para el lavado del material.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Membranas de filtro reticuladas de 0,45 micrones; material de vidrio lavado con agua filtrada; jeringas sin silicona; juegos de envases patrón de defectos para la inspección visual.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Esferas de calibración; membranas; agua libre de partículas.

Unidad

1/m3 · partículas por envase o por mL mayores a 10 y a 25 micrones

Rango de referencia

Envases de más de 100 mL: menos de 25 partículas por mL de 10 micrones y menos de 3 por mL de 25 micrones por oscurecimiento de luz; envases de 100 mL o menos: menos de 6.000 por envase de 10 micrones y menos de 600 de 25 micrones

Norma que lo exige

Ley 16.463 y la Disposición ANMAT 3827/2018 de buenas prácticas de fabricación; la Farmacopea Argentina y las monografías de inyectables, que exigen los límites de partículas subvisibles y la ausencia de partículas visibles; los registros de especialidades medicinales ante la ANMATargentina e internacional

Norma que describe la técnica

USP <788> para partículas subvisibles en inyectables por oscurecimiento de luz y por microscopía; USP <789> para soluciones oftálmicas; USP <790> para partículas visibles y USP <1790> para la inspección visual; USP <787> para productos proteicos; Farmacopea Europea 2.9.19 y 2.9.20argentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

USP <788> y USP <790>, USP-NF 2024

Volumen de muestra

Para envases grandes, una unidad; para envases de menos de 25 mL, se reúnen al menos 10 unidades hasta tener 25 mL; para inspección visual, todos los envases del lote o la muestra estadística de la norma

Conservación y transporte

El ensayo se hace en cabina de flujo laminar o en un ambiente que no aporte partículas, con material de vidrio lavado con agua filtrada y verificado con blancos; el laboratorio tiene que demostrar que su blanco tiene menos de 25 partículas de 10 micrones por 25 mL. Los envases se dejan reposar para eliminar burbujas y se invierten suavemente para resuspender las partículas antes de abrir. Los polvos se reconstituyen con diluyente filtrado. Las soluciones viscosas se diluyen o se calientan si la monografía lo permite; si no, van al método microscópico.

Límite de detección típico

Partículas de 2 micrones en el contador; el método informa desde 10 micrones

Incertidumbre típica

±10 a 20 % en el recuento por la estadística de Poisson y la calibración del sensor

Área

Farmacéutico; Metrología y calibración; Química analítica

Fecha de última actualización: 9/9/2026