Alelos HLA de clase II por PCR con sondas específicas y secuenciación masiva, y detección de anticuerpos anti-HLA para trasplante

Fundamento

Los genes HLA son los más polimórficos del genoma humano, con miles de alelos, y la tipificación consiste en identificar cuáles tiene cada persona. En la tipificación por PCR con sondas específicas de secuencia, el ADN se amplifica con cebadores de cada locus y los productos se hibridan con cientos de sondas de oligonucleótidos unidas a microesferas de colores o a membranas; el patrón de sondas que hibridan se compara con la base de alelos y da la asignación a resolución intermedia, suficiente para la mayoría de los trasplantes de órganos. La tipificación por secuenciación masiva amplifica cada gen completo o sus exones principales, secuencia y ensambla los alelos, y da resolución alélica completa, sin ambigüedades, que es la que exige el trasplante de médula no emparentado; la secuenciación de Sanger y los cebadores específicos de secuencia se usan para confirmar y para urgencias. Del lado del receptor, los anticuerpos contra antígenos HLA, que se forman por embarazos, transfusiones y trasplantes previos, se detectan con microesferas recubiertas de antígenos HLA únicos leídas por citometría de flujo, y se define contra qué antígenos del donante el receptor tiene anticuerpos preformados, que son una contraindicación; la prueba cruzada por citometría entre el suero del receptor y las células del donante confirma. Los resultados se informan con la nomenclatura oficial de la OMS.

Analito (qué se busca)

alelos HLA de clase II

Matriz (en qué muestra)

Sangre periférica con EDTA o ACD; hisopado bucal; ADN; suero para anticuerpos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Extractor de ADN; termociclador; equipo de lectura de microesferas por fluorescencia o citómetro de flujo; secuenciador masivo y secuenciador de Sanger; software de asignación de alelos con la base de datos IPD-IMGT/HLA actualizada; centrífuga; freezer.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de tipificación por sondas o por secuenciación de cada locus con registro; kits de anticuerpos anti-HLA de antígeno único; sueros de control; células de donante para pruebas cruzadas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos con EDTA o ACD; hisopos bucales; placas; puntas libres de nucleasas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; microesferas; celdas de flujo; reactivos de secuenciación.

Unidad

Ninguna · alelos HLA en nomenclatura oficial, a dos, cuatro o más campos · intensidad media de fluorescencia de los anticuerpos · % de anticuerpos reactivos contra el panel

Rango de referencia

Se tipifican al menos HLA-A, B, C, DRB1 y DQB1; la compatibilidad para médula no emparentada exige 10 de 10 o 8 de 8 alelos a resolución alélica; un anticuerpo donante-específico con intensidad media de fluorescencia mayor a 1.000 a 3.000 se considera relevante

Norma que lo exige

Ley 27.447 de trasplante de órganos, tejidos y células y las resoluciones del INCUCAI, que exigen la tipificación HLA para la inscripción en lista de espera y la donación, y que habilitan los laboratorios de histocompatibilidad; el Registro Nacional de Donantes de Células Progenitoras Hematopoyéticas del INCUCAI; Ley 26.529 de derechos del paciente; las normas de acreditación de laboratorios de histocompatibilidadnorma internacional

Norma que describe la técnica

Los estándares de la Federación Europea de Inmunogenética (EFI) y de la Sociedad Americana de Histocompatibilidad e Inmunogenética (ASHI) para los laboratorios de histocompatibilidad; la nomenclatura de los factores del sistema HLA de la OMS y la base IPD-IMGT/HLA; las instrucciones de uso de los kits registrados; ISO 15189; los programas de control de calidad externo de las asociacionesnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

Estándares EFI, versión 8.0 (2022); ASHI Standards (2023)

Volumen de muestra

5 a 10 mL de sangre con EDTA o ACD; hisopado bucal para donantes del registro; 2 a 5 mL de suero para anticuerpos, con muestras seriadas cada tres meses en lista de espera

Conservación y transporte

La sangre se conserva refrigerada hasta una semana para extraer ADN; para pruebas cruzadas con células se procesa dentro de las 24 a 48 horas. Los sueros de los pacientes en lista de espera se toman periódicamente y se guardan congelados en seroteca, porque los anticuerpos cambian y la prueba cruzada se hace con el suero más reciente y con los históricos. La identidad de la muestra se verifica con doble identificación y, en trasplante, con una segunda muestra independiente; un error de identidad en HLA es un rechazo. Las bases de alelos se actualizan trimestralmente.

Límite de detección típico

No aplica en tipificación; los anticuerpos se detectan desde intensidades de fluorescencia de 500 a 1.000 según el laboratorio

Incertidumbre típica

Concordancia mayor al 99 % entre laboratorios en los programas de control de calidad para la tipificación; la interpretación de anticuerpos de baja intensidad varía entre centros

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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