Alelos HLA de clase II por PCR con sondas específicas y secuenciación masiva, y detección de anticuerpos anti-HLA para trasplante

Fundamento

Se amplifica cada locus y se lo tipifica por hibridación con sondas específicas o, cada vez más, por secuenciación masiva, que resuelve el alelo completo y evita las ambigüedades. La asignación depende de una base de datos que crece todos los meses, de modo que mantenerla actualizada es parte del método y no una tarea informática aparte.

Analito (qué se busca)

Alelos HLA de clase II

Matriz (en qué muestra)

Sangre periférica con EDTA o ACD; hisopado bucal; ADN; suero para anticuerpos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Extractor de ADN; termociclador; secuenciador masivo y secuenciador de Sanger; lector de microesferas por fluorescencia; programa de asignación de alelos con la base IPD-IMGT/HLA actualizada; centrífuga; freezer.

Proveedores de Centrífugas · Biología molecular.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de tipificación de los loci de clase II por sondas o por secuenciación, con registro vigente; controles; reactivos de extracción de ADN.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos con EDTA o ACD; hisopos bucales; placas y puntas libres de nucleasas; seroteca con los sueros periódicos del paciente en lista de espera.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; microesferas; celdas de flujo; reactivos de secuenciación.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Unidad

Ninguna · alelos HLA en nomenclatura oficial, a dos, cuatro o más campos · intensidad media de fluorescencia de los anticuerpos · % de anticuerpos reactivos contra el panel

Rango de referencia

Se informa por campos del alelo; en médula ósea se exige alta resolución en todos los loci evaluados

Norma que lo exige

Ley 27.447 de trasplante de órganos, tejidos y células y las resoluciones del INCUCAI, que exigen la tipificación HLA para la inscripción en lista de espera y la donación, y que habilitan los laboratorios de histocompatibilidad; el Registro Nacional de Donantes de Células Progenitoras Hematopoyéticas del INCUCAI; Ley 26.529 de derechos del paciente; las normas de acreditación de laboratorios de histocompatibilidadnorma internacional

Norma que describe la técnica

Los estándares de la Federación Europea de Inmunogenética (EFI) y de la Sociedad Americana de Histocompatibilidad e Inmunogenética (ASHI) para los laboratorios de histocompatibilidad; la nomenclatura de los factores del sistema HLA de la OMS y la base IPD-IMGT/HLA; las instrucciones de uso de los kits registrados; ISO 15189; los programas de control de calidad externo de las asociacionesnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

Estándares EFI, versión 8.0 (2022); ASHI Standards (2023)

Volumen de muestra

5 a 10 mL de sangre con EDTA o ACD; hisopado bucal para donantes del registro; 2 a 5 mL de suero para anticuerpos, con muestras seriadas cada tres meses en lista de espera

Conservación y transporte

La sangre se conserva refrigerada hasta una semana para extraer ADN; para pruebas cruzadas con células se procesa dentro de las 24 a 48 horas. Los sueros de los pacientes en lista de espera se toman periódicamente y se guardan congelados en seroteca, porque los anticuerpos cambian y la prueba cruzada se hace con el suero más reciente y con los históricos. La identidad de la muestra se verifica con doble identificación y, en trasplante, con una segunda muestra independiente; un error de identidad en HLA es un rechazo. Las bases de alelos se actualizan trimestralmente.

Límite de detección típico

No aplica en tipificación; los anticuerpos se detectan desde intensidades de fluorescencia de 500 a 1.000 según el laboratorio

Incertidumbre típica

Concordancia mayor al 99 % entre laboratorios en los programas de control de calidad para la tipificación; la interpretación de anticuerpos de baja intensidad varía entre centros

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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