ARN viral en aRN extraído

Fundamento

El ARN viral se detecta por transcripción reversa acoplada a PCR en tiempo real, que resuelve un problema concreto: la polimerasa de la PCR no copia ARN, así que primero una transcriptasa reversa lo convierte en ADN complementario y sobre eso se amplifica. La detección en tiempo real mide la fluorescencia en cada ciclo, y el ciclo en que la señal supera el umbral es inversamente proporcional a la cantidad inicial, lo que permite cuantificar. Es el método de referencia para virus de ARN. Su punto débil es la fragilidad del ARN: la cadena de frío y la ausencia de ribonucleasas deciden el resultado, y un control interno de extracción es indispensable para distinguir un negativo real de un fallo técnico.

Analito (qué se busca)

ARN viral

Matriz (en qué muestra)

ARN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador de tiempo real; cabina de PCR; microcentrífuga refrigerada.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Master mix de un paso con transcriptasa reversa y polimerasa; cebadores y sondas; control de gen de referencia; inhibidor de ARNasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas ópticas; gradillas frías.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; placas.

Unidad

copias/mL

Rango de referencia

Según ensayo validado

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

10 a 100 ng de ARN por reacción

Conservación y transporte

Tubo con el ARN en agua libre de nucleasas, congelado a −70 °C. El ARN se degrada en minutos a temperatura ambiente: todo el manejo va en frío y con material libre de RNasas.

Límite de detección típico

10 copias por reacción

Incertidumbre típica

±20 a 30%: la transcripción reversa suma su propia variabilidad

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 5/10/2026

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