Concentración
Clonado molecular: ligación, transformación bacteriana y selección de colonias
Es la base del trabajo de laboratorio en biotecnología: permite multiplicar un gen de interés para producir proteínas, hacer mutagénesis o construir vectores.
- Fundamento
- El fragmento y el vector se cortan con las mismas enzimas de restricción o se unen por ensamblado sin cortes. La ligasa los une, el producto se introduce en bacterias competentes por choque térmico o electroporación, y se siembran en medio con antibiótico donde solo crecen las que incorporaron el plásmido.
- Analito (qué se busca)
- Fragmentos de ADN clonados
- Matriz (en qué muestra)
- ADN plasmídico; producto de PCR
- Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?
- Baño termostático a 42 °C; electroporador; estufa a 37 °C con agitación; centrífuga refrigerada; termociclador.
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- Reactivos¿Dónde lo compro?
- Enzimas de restricción; ADN ligasa; bacterias competentes; antibióticos de selección; medio LB; X-gal e IPTG.
- Material de laboratorio¿Dónde lo compro?
- Placas de Petri; tubos de cultivo; cubetas de electroporación; puntas con filtro.
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- Consumibles¿Dónde lo compro?
- Enzimas; bacterias competentes; medios; antibióticos.
- Unidad
- UFC/g · % de colonias positivas · eficiencia de transformación · UFC por microgramo de ADN
- Rango de referencia
- Bacterias químicamente competentes: 10⁶ a 10⁸ UFC por microgramo de plásmido
- Norma que describe la técnica
- Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook y Green)
- Edición y vigencia de la norma
- Molecular Cloning, 4ª edición, vigente
- Volumen de muestra
- 50 a 200 ng de vector y de inserto por reacción de ligación
- Conservación y transporte
- El ADN va en agua libre de nucleasas o en buffer TE, a −20 °C. Las bacterias competentes se guardan a −80 °C y se descongelan en hielo una sola vez: un ciclo de congelado y descongelado extra les baja la eficiencia diez veces o más. Todo el manejo en frío.
- Límite de detección típico
- Se puede transformar con menos de 1 pg de plásmido superenrollado
- Incertidumbre típica
- La eficiencia varía un orden de magnitud entre lotes de bacterias competentes
- Área
- Biología molecular
Fecha de última actualización: 8/9/2026
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170 laboratorios trabajan en biología molecular.
Sin confirmación del laboratorio, el cruce es por área de trabajo y no por esta técnica en particular: conviene preguntar antes de mandar la muestra.
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