Lo que no se mide no existe
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Concentración

Clonado molecular: ligación, transformación bacteriana y selección de colonias

Es la base del trabajo de laboratorio en biotecnología: permite multiplicar un gen de interés para producir proteínas, hacer mutagénesis o construir vectores.

Biología molecularADN plasmídico; producto de PCR
Fundamento
El fragmento y el vector se cortan con las mismas enzimas de restricción o se unen por ensamblado sin cortes. La ligasa los une, el producto se introduce en bacterias competentes por choque térmico o electroporación, y se siembran en medio con antibiótico donde solo crecen las que incorporaron el plásmido.
Analito (qué se busca)
Fragmentos de ADN clonados
Matriz (en qué muestra)
ADN plasmídico; producto de PCR
Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?
Baño termostático a 42 °C; electroporador; estufa a 37 °C con agitación; centrífuga refrigerada; termociclador.

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Reactivos¿Dónde lo compro?
Enzimas de restricción; ADN ligasa; bacterias competentes; antibióticos de selección; medio LB; X-gal e IPTG.
Material de laboratorio¿Dónde lo compro?
Placas de Petri; tubos de cultivo; cubetas de electroporación; puntas con filtro.

Proveedores de Cultivo y microbiología · Micropipetas y puntas.

Consumibles¿Dónde lo compro?
Enzimas; bacterias competentes; medios; antibióticos.
Unidad
UFC/g · % de colonias positivas · eficiencia de transformación · UFC por microgramo de ADN
Rango de referencia
Bacterias químicamente competentes: 10⁶ a 10⁸ UFC por microgramo de plásmido
Norma que describe la técnica
Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook y Green)
Edición y vigencia de la norma
Molecular Cloning, 4ª edición, vigente
Volumen de muestra
50 a 200 ng de vector y de inserto por reacción de ligación
Conservación y transporte
El ADN va en agua libre de nucleasas o en buffer TE, a −20 °C. Las bacterias competentes se guardan a −80 °C y se descongelan en hielo una sola vez: un ciclo de congelado y descongelado extra les baja la eficiencia diez veces o más. Todo el manejo en frío.
Límite de detección típico
Se puede transformar con menos de 1 pg de plásmido superenrollado
Incertidumbre típica
La eficiencia varía un orden de magnitud entre lotes de bacterias competentes
Área
Biología molecular

Fecha de última actualización: 8/9/2026

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