Clonado molecular: ligación, transformación bacteriana y selección de colonias

Fundamento

El fragmento y el vector se cortan con las mismas enzimas de restricción o se unen por ensamblado sin cortes. La ligasa los une, el producto se introduce en bacterias competentes por choque térmico o electroporación, y se siembran en medio con antibiótico donde solo crecen las que incorporaron el plásmido.

Analito (qué se mide)

Fragmentos de ADN clonados

Matriz (en qué muestra)

ADN plasmídico; producto de PCR

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Baño termostático a 42 °C; electroporador; estufa a 37 °C con agitación; centrífuga refrigerada; termociclador.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Enzimas de restricción; ADN ligasa; bacterias competentes; antibióticos de selección; medio LB; X-gal e IPTG.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas de Petri; tubos de cultivo; cubetas de electroporación; puntas con filtro.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Enzimas; bacterias competentes; medios; antibióticos.

Unidad

UFC por microgramo de ADN · % de colonias positivas · eficiencia de transformación

Rango de referencia

Bacterias químicamente competentes: 10⁶ a 10⁸ UFC por microgramo de plásmido

Norma que describe la técnica

Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook y Green)

Edición y vigencia de la norma

Molecular Cloning, 4ª edición, vigente

Volumen de muestra

50 a 200 ng de vector y de inserto por reacción de ligación

Conservación y transporte

El ADN va en agua libre de nucleasas o en buffer TE, a −20 °C. Las bacterias competentes se guardan a −80 °C y se descongelan en hielo una sola vez: un ciclo de congelado y descongelado extra les baja la eficiencia diez veces o más. Todo el manejo en frío.

Límite de detección típico

Se puede transformar con menos de 1 pg de plásmido superenrollado

Incertidumbre típica

La eficiencia varía un orden de magnitud entre lotes de bacterias competentes

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 8/9/2026