Cuantificación fluorométrica con colorante intercalante

Fundamento

Un fluoróforo que solo emite al unirse específicamente al ADN de doble cadena se agrega a la muestra; la fluorescencia se compara contra una curva de estándares. Al ser específico, ignora nucleótidos libres, ARN y proteínas.

Analito (qué se mide)

ADN de doble cadena

Matriz (en qué muestra)

Extracto purificado

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Fluorómetro de sobremesa; vórtex.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Colorante fluorescente específico para ADNds; buffer de dilución; estándares de calibración.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos de ensayo del fluorómetro; micropipetas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Tubos y puntas dedicados.

Unidad

ng/µL · pg/µL

Rango de referencia

Sensibilidad desde 0,1 ng/µL

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

1 a 20 µL de extracto

Conservación y transporte

Igual que el anterior. El colorante se une solo al ácido nucleico que interesa, así que da un valor más confiable que la absorbancia cuando hay contaminantes.

Límite de detección típico

0,01 ng/µL de ADN

Incertidumbre típica

±5 a 10%

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026