Detección de micoplasma por PCR

Fundamento

El micoplasma no se ve al microscopio ni enturbia el medio, pero altera el metabolismo celular. Se amplifican regiones conservadas del ARNr 16S de micoplasmas a partir del sobrenadante del cultivo y se revela el producto por electroforesis o fluorescencia.

Analito (qué se mide)

Contaminación por micoplasma

Matriz (en qué muestra)

Cultivo celular

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador; cuba de electroforesis; microcentrífuga; cabina de PCR.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kit de detección de micoplasma; cebadores específicos; controles positivo y negativo.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos de 0,2 y 1,5 mL; geles de agarosa.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro.

Unidad

Presencia/Ausencia

Rango de referencia

Ausencia (control mensual recomendado)

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

1 a 2 mL de sobrenadante de un cultivo de al menos 3 días sin antibióticos

Conservación y transporte

Tubo estéril. Refrigerar a 4 °C y procesar dentro de la semana, o congelar a −20 °C. El cultivo no debe tener antibióticos: enmascaran el micoplasma y dan falsos negativos.

Límite de detección típico

Del orden de 10 a 100 copias de genoma por reacción

Incertidumbre típica

Cualitativo; se corre con control positivo y con control de inhibición

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026