Detección y cuantificación de organismos genéticamente modificados en alimentos por PCR

Fundamento

La detección de organismos genéticamente modificados se apoya en la reacción en cadena de la polimerasa, que amplifica de manera exponencial una secuencia de ADN definida por un par de cebadores y la hace detectable. El análisis se organiza en niveles de especificidad crecientes: los métodos de tamizaje apuntan a elementos genéticos presentes en la mayoría de las construcciones —promotores y terminadores de uso extendido—, y un resultado positivo indica que hay algo modificado sin decir qué; los métodos específicos de gen o de constructo estrechan el foco; y los específicos de evento amplifican la unión entre el inserto y el genoma receptor, que es única de cada evento aprobado y permite identificarlo de manera inequívoca. La cuantificación se hace por reacción en tiempo real, midiendo la fluorescencia ciclo a ciclo y comparando el ciclo umbral de la secuencia transgénica con el de un gen de referencia de la especie, de donde surge el porcentaje. Antes de todo eso está la etapa que más condiciona el resultado: la extracción de ADN de calidad y cantidad suficientes desde matrices procesadas, donde el ADN está fragmentado por el calor y la presión, y donde los inhibidores de la reacción —polifenoles, polisacáridos, grasas— abundan. La selección y validación de métodos y la evaluación estadística de los resultados completan el marco.

Analito (qué se mide)

Secuencias de ADN de organismos genéticamente modificados en alimentos

Matriz (en qué muestra)

Granos de soja, maíz y algodón; harinas, aceites y derivados; alimentos elaborados y alimentos para animales; semillas y material de propagación; partidas en control de exportación con exigencia de etiquetado

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador en tiempo real con detección de fluorescencia; termociclador convencional; equipo de extracción y purificación de ADN; espectrofotómetro y fluorímetro para cuantificar ADN; equipo de electroforesis; cabinas de trabajo separadas para extracción, preparación de mezclas y amplificación; molino y homogeneizador.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de extracción y de purificación de ADN; polimerasas, cebadores y sondas específicas; materiales de referencia certificados con porcentajes conocidos de material modificado; controles positivos y negativos; agua libre de nucleasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos y placas libres de nucleasas; puntas con filtro; planillas de curvas de amplificación y de resultados; identificación de la partida, del plan de muestreo y de la matriz; contramuestra conservada.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits, cebadores y sondas; plásticos descartables; muestra.

Unidad

kg/kg · resultado del tamizaje y de las determinaciones específicas de evento · porcentaje de material modificado respecto del gen de referencia de la especie · calidad y cantidad del ADN extraído y verificación de ausencia de inhibición · controles positivos, negativos y de extracción de cada serie · plan de muestreo aplicado a la partida

Rango de referencia

La inhibición de la reacción por compuestos de la matriz es la causa más frecuente de falsos negativos y no se detecta sin un control interno de amplificación: una partida con transgénico puede informar ausencia simplemente porque la reacción no corrió, y el resultado se ve idéntico al de una muestra limpia

Norma que lo exige

Las reglamentaciones de etiquetado de alimentos que contienen organismos genéticamente modificados y sus umbrales; las exigencias de los mercados de exportación y los certificados de identidad preservada; los protocolos de control de semillas y de material de propagación; las normas de acreditación del laboratorioargentina e internacional

Norma que describe la técnica

IRAM-ISO 24276, que fija los requisitos generales y las definiciones de los métodos de análisis para la detección de organismos genéticamente modificados; IRAM-ISO 21571, sobre los métodos de extracción de ácidos nucleicos; IRAM-ISO 21572, sobre los métodos inmunoquímicos para el análisis de biomarcadores moleculares; IRAM-ISO 13495, sobre los principios de selección y los criterios de validación de métodos; IRAM-ISO 22753, sobre el método para la evaluación estadística de los resultadosargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

IRAM-ISO 24276:2010; IRAM-ISO 21571:2010; IRAM-ISO 21572:2010; IRAM-ISO 13495:2010; IRAM-ISO 22753:2010

Volumen de muestra

Destructivo. Muestra global molida; de 100 a 500 mg de porción de ensayo

Conservación y transporte

Las áreas de extracción, de preparación de mezclas y de amplificación se mantienen físicamente separadas y con flujo de trabajo en un solo sentido, porque el producto amplificado de una reacción anterior es la fuente de contaminación más potente que existe en un laboratorio de biología molecular y produce falsos positivos sistemáticos. Se corren controles de extracción y de inhibición en cada serie.

Límite de detección típico

Del orden del 0,1 % de material modificado según la matriz y el evento

Incertidumbre típica

Del 20 al 50 % relativo cerca del límite de cuantificación; el muestreo de la partida aporta la mayor contribución

Área

Biología molecular; Alimentos y bebidas; Agronomía

Fecha de última actualización: 11/9/2026