Exoma por síntesis (NGS)

Fundamento

El ADN se fragmenta y se le ligan adaptadores para formar una biblioteca; los fragmentos se amplifican en clusters sobre una celda de flujo y se secuencian por síntesis, incorporando nucleótidos marcados que se detectan ciclo a ciclo por imagen.

Analito (qué se busca)

exoma

Matriz (en qué muestra)

ADN o ARN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Secuenciador de segunda generación; fluorómetro; equipo de fragmentación; sistema de análisis bioinformático.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de preparación de biblioteca; adaptadores con índices; perlas magnéticas de purificación; cartuchos de reactivos de secuenciación.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas; gradillas magnéticas; celdas de flujo.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Cartuchos y celdas de flujo de un solo uso; puntas con filtro.

Unidad

m · lecturas (reads) · Gb · profundidad de cobertura (X) · %Q30

Rango de referencia

Panel clínico: ≥100X · exoma: ≥50-100X

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

50 ng a 1 µg de ADN, o 100 ng a 1 µg de ARN

Conservación y transporte

Congelado a −20 °C el ADN, a −70 °C el ARN. La integridad se mide antes de armar la librería: una muestra degradada da una librería sesgada y el resultado no se puede corregir después.

Límite de detección típico

Detecta variantes al 1 a 5% de frecuencia con profundidad suficiente

Incertidumbre típica

Depende de la profundidad de lectura; se informa con la cobertura de cada posición

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 3119 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos