Exoma por síntesis (NGS)

Fundamento

El ácido nucleico se fragmenta, se le pegan adaptadores con índices y la biblioteca resultante se secuencia leyendo millones de fragmentos en paralelo. El trabajo pesado viene después: el análisis bioinformático alinea las lecturas, llama las variantes y las anota. La calidad del material de partida manda sobre todo lo demás: una muestra degradada da una biblioteca sesgada y eso no se corrige en el análisis. El exoma agrega un paso de captura con sondas, que selecciona las regiones que codifican proteínas antes de secuenciar.

Analito (qué se busca)

Exoma

Matriz (en qué muestra)

ADN o ARN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Secuenciador de segunda generación; fluorómetro para cuantificar el ADN; equipo de fragmentación; gradilla magnética; sistema de análisis bioinformático con su almacenamiento.

Proveedores de Biología molecular.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de preparación de biblioteca y de captura de exoma; adaptadores con índices; perlas magnéticas; cartuchos de reactivos; celdas de flujo.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas y gradillas magnéticas; celdas de flujo; puntas con filtro; registro de la integridad del ácido nucleico de partida.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Cartuchos y celdas de flujo de un solo uso; puntas con filtro.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Unidad

m · lecturas (reads) · Gb · profundidad de cobertura (X) · %Q30

Rango de referencia

La profundidad habitual es de cien lecturas por posición; conviene informar qué porcentaje del exoma quedó con cobertura suficiente

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

50 ng a 1 µg de ADN, o 100 ng a 1 µg de ARN

Conservación y transporte

Congelado a −20 °C el ADN, a −70 °C el ARN. La integridad se mide antes de armar la librería: una muestra degradada da una librería sesgada y el resultado no se puede corregir después.

Límite de detección típico

Detecta variantes al 1 a 5% de frecuencia con profundidad suficiente

Incertidumbre típica

Depende de la profundidad de lectura; se informa con la cobertura de cada posición

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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