Extracción de ADN por columna de sílice

Fundamento

Las células se lisan con detergente y proteinasa K; en presencia de sales caotrópicas el ADN se adsorbe selectivamente a una membrana de sílice, se lava para eliminar proteínas y sales, y finalmente se eluye con buffer de baja fuerza iónica.

Analito (qué se busca)

ADN genómico

Matriz (en qué muestra)

Sangre / tejido / cultivo

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microcentrífuga refrigerada; termobloque 56 °C; vórtex; campana de extracción.

Proveedores de Baños, agitación y homogeneización · Seguridad y protección.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Buffer de lisis con sales caotrópicas; proteinasa K; etanol absoluto; buffers de lavado y elución; ARNasa A.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Columnas de sílice; tubos de colección de 2 mL; micropipetas.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; tubos de 1,5 mL libres de nucleasas.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Unidad

kg/m³ · ng/µL · µg totales

Rango de referencia

Rendimiento típico 20-200 ng/µL

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

200 µL de sangre entera, 10 a 25 mg de tejido, o 10⁶ células

Conservación y transporte

Sangre con EDTA a 4 °C hasta 7 días, o congelada a −20 °C. Tejido fresco congelado a −70 °C, o en RNAlater. El tejido en formol da ADN muy fragmentado: sirve, pero rinde poco.

Límite de detección típico

10 ng de ADN por microlitro de eluido

Incertidumbre típica

El rendimiento varía mucho con el tipo de muestra; se controla con A260/A280

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 3/9/2026

Ficha N.º 679 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos