Genoma por síntesis (NGS)

Fundamento

El ácido nucleico se fragmenta, se le pegan adaptadores con índices y la biblioteca resultante se secuencia leyendo millones de fragmentos en paralelo. El trabajo pesado viene después: el análisis bioinformático alinea las lecturas, llama las variantes y las anota. La calidad del material de partida manda sobre todo lo demás: una muestra degradada da una biblioteca sesgada y eso no se corrige en el análisis.

Analito (qué se busca)

Genoma

Matriz (en qué muestra)

ADN o ARN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Secuenciador de segunda generación; fluorómetro para cuantificar el ADN; equipo de fragmentación; gradilla magnética; sistema de análisis bioinformático con su almacenamiento.

Proveedores de Biología molecular.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de preparación de biblioteca de genoma completo; adaptadores con índices; perlas magnéticas de purificación; cartuchos de reactivos de secuenciación; celdas de flujo.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas y gradillas magnéticas; celdas de flujo; puntas con filtro; registro de la integridad del ácido nucleico de partida.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Cartuchos y celdas de flujo de un solo uso; puntas con filtro.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Unidad

m · lecturas (reads) · Gb · profundidad de cobertura (X) · %Q30

Rango de referencia

La profundidad habitual para un genoma completo es de treinta lecturas por posición; se informa junto con la cobertura alcanzada

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

50 ng a 1 µg de ADN, o 100 ng a 1 µg de ARN

Conservación y transporte

Congelado a −20 °C el ADN, a −70 °C el ARN. La integridad se mide antes de armar la librería: una muestra degradada da una librería sesgada y el resultado no se puede corregir después.

Límite de detección típico

Detecta variantes al 1 a 5% de frecuencia con profundidad suficiente

Incertidumbre típica

Depende de la profundidad de lectura; se informa con la cobertura de cada posición

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 3118 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos