Identificación varietal por análisis de microsatélites en maíz, girasol y algodón

Fundamento

Los microsatélites, o secuencias simples repetidas, son tramos cortos de ADN repetidos en tándem un número variable de veces, distribuidos por todo el genoma y muy polimórficos: el número de repeticiones en cada locus difiere entre individuos y entre líneas, de modo que el conjunto de valores obtenidos en un panel de loci constituye un perfil que identifica a la variedad con una probabilidad de coincidencia fortuita extremadamente baja. Su determinación se hace amplificando cada locus por reacción en cadena de la polimerasa con cebadores que flanquean la región repetida y separando los productos por electroforesis capilar, que resuelve diferencias de pocos pares de bases, con marcado fluorescente que permite analizar varios loci a la vez. La comparación entre perfiles requiere un panel de loci acordado y una nomenclatura común, porque el valor de cada alelo se expresa por su tamaño y ese tamaño debe ser comparable entre laboratorios: de ahí que las normas definan los paneles y los materiales de referencia por especie. Las aplicaciones son varias: verificación de la pureza genética de un lote de semilla híbrida, identificación de variedades en conflictos de propiedad intelectual, verificación de la identidad declarada y trazabilidad del algodón a lo largo de la cadena textil, que es un desarrollo reciente.

Analito (qué se mide)

Secuencias simples repetidas y microsatélites en maíz, girasol y algodón

Matriz (en qué muestra)

Semillas de maíz, girasol y algodón; líneas parentales e híbridos comerciales; lotes de semilla fiscalizada; muestras en litigios de propiedad intelectual sobre variedades; fibra de algodón en trazabilidad textil

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador; analizador genético de electroforesis capilar con detección fluorescente; equipo de extracción y purificación de ADN; fluorímetro para cuantificar ADN; cabinas de trabajo separadas; molino de semillas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de extracción de ADN; polimerasas y cebadores marcados con fluoróforos de los paneles normalizados; patrón de tamaño interno; materiales de referencia de variedades conocidas; agua libre de nucleasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas y tubos libres de nucleasas; planillas y electroferogramas de cada muestra; base de perfiles de referencia; identificación del lote, de la variedad declarada y del solicitante.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits y cebadores marcados; polímero del analizador; plásticos descartables; muestra.

Unidad

m · perfil de alelos por locus del panel empleado · panel de loci y nomenclatura de referencia utilizada · coincidencia o discrepancia con el perfil de la variedad declarada · pureza genética estimada del lote cuando corresponde · materiales de referencia de variedades conocidas incluidos en la serie

Rango de referencia

La comparación entre laboratorios exige el mismo panel de loci y la misma nomenclatura de alelos, porque el tamaño medido depende del sistema de electroforesis y de los fluoróforos: dos laboratorios pueden informar tamaños distintos para el mismo alelo, y sin materiales de referencia comunes los perfiles no se pueden cotejar

Norma que lo exige

Las reglamentaciones de semillas y de propiedad intelectual sobre variedades vegetales, que admiten el perfil molecular como criterio de identidad; los protocolos de fiscalización de semilla y de verificación de pureza genética de híbridos; los sistemas de trazabilidad de fibra de algodón; las normas de acreditación del laboratorioargentina e internacional

Norma que describe la técnica

IRAM 25000, que fija el análisis de secuencias simples repetidas como biomarcadores moleculares; IRAM-ISO TR 17623, sobre el análisis de microsatélites en maíz; IRAM-ISO TR 17622, sobre el análisis de secuencias simples repetidas de girasol; IRAM-ISO TS 5354-2, sobre la detección de ADN en el algodón utilizado en la producción textil; IRAM-ISO 22753, sobre la evaluación estadística de los resultadosargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

IRAM 25000:2010; IRAM-ISO TR 17623:2015; IRAM-ISO TR 17622:2015; IRAM-ISO TS 5354-2:2020; IRAM-ISO 22753:2010

Volumen de muestra

Destructivo. De 10 a 100 semillas o de miligramos de tejido

Conservación y transporte

Se incluyen en cada serie variedades de referencia de perfil conocido, porque son la única manera de verificar que la asignación de tamaños de alelo es correcta y comparable con la base de perfiles. Para la pureza genética de un lote se analizan semillas individuales y no una mezcla, dado que un análisis conjunto promedia y oculta la presencia de fuera de tipo.

Límite de detección típico

El método detecta un individuo fuera de tipo cuando se analizan semillas individuales

Incertidumbre típica

La asignación de alelos es discreta; la pureza estimada tiene la incertidumbre del tamaño de muestra

Área

Biología molecular; Agronomía; Criminalística

Fecha de última actualización: 11/9/2026