MLPA (amplificación múltiple de sondas dependiente de ligación)

Fundamento

Pares de sondas hibridan en posiciones contiguas del blanco y solo se ligan si ambas encontraron su secuencia; los productos ligados se amplifican con un único par de cebadores universales y se separan por electroforesis capilar, comparando la altura de cada pico con muestras de referencia.

Analito (qué se mide)

Dosis génica (deleciones y duplicaciones)

Matriz (en qué muestra)

ADN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador; secuenciador de electroforesis capilar; software de análisis de dosis.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Mezclas de sondas MLPA específicas; ligasa; polimerasa; buffer de hibridación; estándar de tamaño; formamida.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas de 96 pocillos; tubos de 0,2 mL.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; capilares.

Unidad

Relación de dosis · N.º de copias

Rango de referencia

Normal ≈1,0 · deleción ≈0,5 · duplicación ≈1,5

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

50 a 100 ng de ADN por reacción

Conservación y transporte

ADN en TE o agua, a −20 °C. La calidad del ADN es crítica: el MLPA es muy sensible a contaminantes de la extracción y da falsas deleciones.

Límite de detección típico

Detecta deleciones y duplicaciones de una sola copia

Incertidumbre típica

±10% en la relación de dosis; fuera del rango 0,8-1,2 se considera alterado

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 3/9/2026