PCR de punto final

Fundamento

Ciclos repetidos de desnaturalización, hibridación de cebadores y extensión por una ADN polimerasa termoestable duplican exponencialmente la región delimitada por los cebadores. El producto se visualiza al final por electroforesis.

Analito (qué se mide)

Secuencia blanco de ADN

Matriz (en qué muestra)

ADN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador; cabina de PCR con UV; microcentrífuga; cuba de electroforesis.

Reactivos¿Dónde lo compro?

ADN polimerasa termoestable; dNTPs; buffer con MgCl2; cebadores específicos; agua libre de nucleasas; controles positivo y negativo.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos o tiras de 0,2 mL; gradillas frías; micropipetas dedicadas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; tubos de pared fina.

Unidad

Presencia/Ausencia · pb del amplicón

Rango de referencia

Según diseño del ensayo

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

1 a 10 ng de ADN por reacción, de un extracto de 20 a 100 µL

Conservación y transporte

Tubo con el ADN en buffer TE o en agua libre de nucleasas. Refrigerar a 4 °C por días, o congelar a −20 °C. Evitar ciclos de congelado y descongelado: fragmentan el ADN.

Límite de detección típico

Del orden de 100 copias de la secuencia buscada

Incertidumbre típica

Cualitativo: hay banda o no hay banda

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026