PCR digital en gotas o en cámaras

Fundamento

La reacción se reparte en miles de particiones de volumen ínfimo, de modo que cada una contiene cero o una copia del blanco. Tras amplificar se cuentan las particiones positivas y la estadística de Poisson devuelve la concentración absoluta.

Analito (qué se mide)

Copias absolutas de secuencia

Matriz (en qué muestra)

ADN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Generador de gotas o chip de particiones; termociclador; lector de gotas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Master mix para PCR digital; sondas y cebadores; aceite generador de gotas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cartuchos de generación; placas de 96 pocillos.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Cartuchos y aceite de un solo uso; puntas con filtro.

Unidad

copias/µL · copias/mL · fracción de alelo (%)

Rango de referencia

Detecta fracciones alélicas de hasta 0,1%

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

1 a 10 ng de ADN por reacción, de un extracto de 20 a 100 µL

Conservación y transporte

Tubo con el ADN en buffer TE o en agua libre de nucleasas. Refrigerar a 4 °C por días, o congelar a −20 °C. Evitar ciclos de congelado y descongelado: fragmentan el ADN.

Límite de detección típico

1 a 5 copias por reacción: es el método más sensible del bloque

Incertidumbre típica

±5 a 15%, y no necesita curva de calibración

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026