PCR múltiplex

Fundamento

Se combinan en un mismo tubo varios pares de cebadores con sondas marcadas con fluoróforos distintos; cada blanco se detecta en su canal óptico, lo que exige diseñar los cebadores para que no compitan ni formen dímeros entre sí.

Analito (qué se busca)

Varias secuencias blanco simultáneas

Matriz (en qué muestra)

ADN o ARN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador de tiempo real multicanal; cabina de PCR.

Proveedores de Biología molecular.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Master mix múltiplex; juegos de cebadores y sondas con fluoróforos diferenciados; controles.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas ópticas; gradillas frías.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; placas.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Unidad

Ninguna · Presencia/Ausencia por blanco · Ct por canal

Rango de referencia

Hasta 4-6 blancos por reacción según equipo

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

1 a 10 ng de ADN por reacción, de un extracto de 20 a 100 µL

Conservación y transporte

Tubo con el ADN en buffer TE o en agua libre de nucleasas. Refrigerar a 4 °C por días, o congelar a −20 °C. Evitar ciclos de congelado y descongelado: fragmentan el ADN.

Límite de detección típico

100 a 1.000 copias por diana, algo peor que la PCR simple

Incertidumbre típica

La competencia entre dianas hace que las minoritarias se detecten peor

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 3/9/2026

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