Recuento y viabilidad celular por exclusión con azul de tripán

Fundamento

El azul de tripán solo atraviesa la membrana de las células muertas, que se tiñen de azul, mientras que las viables permanecen refringentes. El recuento en cámara de Neubauer da la concentración y el porcentaje de viabilidad.

Analito (qué se mide)

Viabilidad y número de células

Matriz (en qué muestra)

Cultivo celular

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microscopio óptico invertido o contador celular automático; campana de flujo laminar.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Solución de azul de tripán 0,4%; PBS estéril; tripsina-EDTA.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cámara de Neubauer; cubreobjetos; pipetas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas estériles; portacámaras desechables.

Unidad

células/mL · % de viabilidad

Rango de referencia

Viabilidad aceptable para subcultivo: ≥90%

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

20 a 100 µL de suspensión celular

Conservación y transporte

Se hace en el momento, sobre el cultivo vivo. El azul de tripano tiñe las células muertas y la lectura tiene que hacerse dentro de los 5 minutos: después el colorante entra también en las vivas y la viabilidad sale falsamente baja.

Límite de detección típico

10.000 células/mL en cámara de Neubauer

Incertidumbre típica

±10 a 20%: es un conteo manual sobre pocos cuadrantes

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026