Reordenamientos de ALK en tejido tumoral por secuenciación, FISH o inmunohistoquímica

Fundamento

El tejido llega fijado en formol e incluido en parafina, y el patólogo marca en el corte el área con más células tumorales y estima su porcentaje, porque el ADN del tumor viene mezclado con el del tejido sano que lo rodea y esa proporción fija lo que el método puede detectar. Sobre el ADN extraído de esa zona se amplifica y se secuencia la región de interés, hoy casi siempre por secuenciación masiva en un panel que cubre varios genes a la vez, y el resultado se informa como variante detectada o no detectada junto con su frecuencia alélica, es decir qué proporción de las lecturas la llevan. ALK no se altera por un cambio de una letra sino por un reordenamiento: el gen se rompe y se fusiona con otro, y la proteína híbrida que resulta queda permanentemente activa. Eso cambia el método, porque un panel pensado para detectar sustituciones puntuales puede no ver una fusión. Se usan tres caminos y conviene saber cuál informó el laboratorio: la inmunohistoquímica, que detecta la proteína y sirve de tamizaje rápido; la hibridación in situ fluorescente, que ve la ruptura del gen; y la secuenciación de ARN, que identifica el gen compañero de la fusión. Un tumor de pulmón con ALK reordenado responde a inhibidores específicos, de modo que el resultado define el tratamiento.

Analito (qué se busca)

ALK

Matriz (en qué muestra)

Tejido tumoral fijado en formol e incluido en parafina; biopsias; citologías; bloques de tumor; ADN tumoral

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microtomo; equipo de hibridación in situ con platina térmica; microscopio de fluorescencia con filtros para las sondas y, para la variante cromogénica, microscopio óptico; teñidor automático de inmunohistoquímica; secuenciador masivo cuando se busca la fusión por ARN.

Proveedores de Biología molecular · Microscopía.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sondas de ruptura de ALK para hibridación in situ; anticuerpo anti ALK para inmunohistoquímica con su sistema de detección; kit de fusiones por ARN cuando se usa secuenciación; controles positivos de tejido.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos cargados; cubreobjetos; cámaras de hibridación; tubos libres de nucleasas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Sondas; anticuerpos y sistema de detección; controles de tejido.

Unidad

1 · reordenamiento detectado o no detectado · gen compañero de la fusión · % de núcleos con señal de ruptura en FISH · intensidad en inmunohistoquímica

Norma que lo exige

Las guías de tratamiento oncológico del Instituto Nacional del Cáncer y las de las sociedades científicas; las obras sociales, las prepagas y el sistema de cobertura de medicamentos de alto costo, que exigen el resultado molecular para autorizar las terapias dirigidas; Ley 26.529 de derechos del paciente; los reactivos requieren registro ante la ANMAT; la Red Nacional de Laboratorios de Biología Molecular en Oncologíanorma argentina

Norma que describe la técnica

La guía de la AMP, el CAP y la IASLC sobre pruebas moleculares para seleccionar pacientes con cáncer de pulmón candidatos a terapias dirigidasnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Guía AMP/ASCO/CAP (2017), vigente; ISO 20387:2018

Volumen de muestra

Bloque de parafina o 5 a 10 cortes de 5 a 10 micrones, con el corte teñido de referencia marcado por el patólogo; al menos 50 a 100 ng de ADN

Conservación y transporte

El tejido tiene que fijarse en formol tamponado entre 6 y 48 horas: la subfijación y la sobrefijación degradan el ADN, y los descalcificadores ácidos lo destruyen. Los cortes se hacen con cuchilla nueva para no arrastrar ADN de otro bloque. La muestra va con el informe de patología y el porcentaje de células tumorales; sin eso, un resultado negativo no se puede interpretar. Los resultados con variantes de significado incierto se informan como tales y se revisan cuando cambia la evidencia.

Límite de detección típico

1 a 5 % de frecuencia alélica según el método y la profundidad de secuenciación

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico; Farmacéutico

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Fecha de última actualización: 1/10/2026

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