Reordenamientos de ROS1 en tejido tumoral por secuenciación, FISH o inmunohistoquímica

Fundamento

El tejido llega fijado en formol e incluido en parafina, y el patólogo marca en el corte el área con más células tumorales y estima su porcentaje, porque el ADN del tumor viene mezclado con el del tejido sano que lo rodea y esa proporción fija lo que el método puede detectar. Sobre el ADN extraído de esa zona se amplifica y se secuencia la región de interés, hoy casi siempre por secuenciación masiva en un panel que cubre varios genes a la vez, y el resultado se informa como variante detectada o no detectada junto con su frecuencia alélica, es decir qué proporción de las lecturas la llevan. ROS1 se altera, como ALK, por fusión con otro gen, y la proteína resultante queda activa de manera permanente. Es poco frecuente —aparece en una fracción pequeña de los adenocarcinomas de pulmón— y justamente por eso su búsqueda se justifica: el subgrupo que lo tiene responde muy bien a inhibidores específicos, de modo que no buscarlo equivale a perder un tratamiento eficaz en un paciente que lo tenía disponible. Se detecta por los mismos tres caminos que ALK, y por la misma razón: un panel que sólo busca sustituciones puntuales no ve una fusión.

Analito (qué se busca)

ROS1

Matriz (en qué muestra)

Tejido tumoral fijado en formol e incluido en parafina; biopsias; citologías; bloques de tumor; ADN tumoral

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microtomo y microscopio para la selección del área tumoral; extractor de ácidos nucleicos para parafina; fluorómetro; termociclador de PCR en tiempo real y equipo de PCR digital; secuenciador masivo de sobremesa; servidor y software de análisis de variantes; equipo de hibridación in situ y microscopio de fluorescencia.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de extracción de parafina; kits de mutaciones por PCR con registro; paneles de secuenciación de genes de cáncer; sondas de hibridación in situ; controles con mutaciones de frecuencia conocida; materiales de referencia certificados.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos; tubos libres de nucleasas; placas; chips o celdas de flujo del secuenciador.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; paneles; celdas de flujo; sondas; controles.

Unidad

1 · reordenamiento detectado o no detectado · gen compañero de la fusión · % de núcleos con señal de ruptura en FISH

Norma que lo exige

Las guías de tratamiento oncológico del Instituto Nacional del Cáncer y las de las sociedades científicas; las obras sociales, las prepagas y el sistema de cobertura de medicamentos de alto costo, que exigen el resultado molecular para autorizar las terapias dirigidas; Ley 26.529 de derechos del paciente; los reactivos requieren registro ante la ANMAT; la Red Nacional de Laboratorios de Biología Molecular en Oncologíaargentina e internacional

Norma que describe la técnica

Las guías de la Asociación para la Patología Molecular, el Colegio Americano de Patólogos y la Asociación Internacional para el Estudio del Cáncer de Pulmón sobre pruebas moleculares en cáncer de pulmón; la guía conjunta de la AMP, ASCO y CAP para la interpretación y el informe de variantes somáticas (Li y colaboradores, 2017); las guías de la NCCN y la ESMO; ISO 15189 e ISO 20387 para los laboratorios; los programas de evaluación externa de la calidadargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

Guía AMP/ASCO/CAP (2017), vigente; ISO 20387:2018

Volumen de muestra

Bloque de parafina o 5 a 10 cortes de 5 a 10 micrones, con el corte teñido de referencia marcado por el patólogo; al menos 50 a 100 ng de ADN

Conservación y transporte

El tejido tiene que fijarse en formol tamponado entre 6 y 48 horas: la subfijación y la sobrefijación degradan el ADN, y los descalcificadores ácidos lo destruyen. Los cortes se hacen con cuchilla nueva para no arrastrar ADN de otro bloque. La muestra va con el informe de patología y el porcentaje de células tumorales; sin eso, un resultado negativo no se puede interpretar. Los resultados con variantes de significado incierto se informan como tales y se revisan cuando cambia la evidencia.

Límite de detección típico

1 a 5 % de frecuencia alélica según el método y la profundidad de secuenciación

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico; Farmacéutico

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Fecha de última actualización: 1/10/2026

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