Tipificación HLA por PCR con sondas específicas y secuenciación masiva, y detección de anticuerpos anti-HLA para trasplante

Fundamento

Los genes HLA son los más polimórficos del genoma humano, con miles de alelos, y la tipificación consiste en identificar cuáles tiene cada persona. En la tipificación por PCR con sondas específicas de secuencia, el ADN se amplifica con cebadores de cada locus y los productos se hibridan con cientos de sondas de oligonucleótidos unidas a microesferas de colores o a membranas; el patrón de sondas que hibridan se compara con la base de alelos y da la asignación a resolución intermedia, suficiente para la mayoría de los trasplantes de órganos. La tipificación por secuenciación masiva amplifica cada gen completo o sus exones principales, secuencia y ensambla los alelos, y da resolución alélica completa, sin ambigüedades, que es la que exige el trasplante de médula no emparentado; la secuenciación de Sanger y los cebadores específicos de secuencia se usan para confirmar y para urgencias. Del lado del receptor, los anticuerpos contra antígenos HLA, que se forman por embarazos, transfusiones y trasplantes previos, se detectan con microesferas recubiertas de antígenos HLA únicos leídas por citometría de flujo, y se define contra qué antígenos del donante el receptor tiene anticuerpos preformados, que son una contraindicación; la prueba cruzada por citometría entre el suero del receptor y las células del donante confirma. Los resultados se informan con la nomenclatura oficial de la OMS.

Analito (qué se mide)

Alelos HLA de clase I (A, B, C) y de clase II (DRB1, DQB1, DQA1, DPB1) y anticuerpos anti-HLA

Matriz (en qué muestra)

Sangre periférica con EDTA o ACD; hisopado bucal; ADN; suero para anticuerpos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Extractor de ADN; termociclador; equipo de lectura de microesferas por fluorescencia o citómetro de flujo; secuenciador masivo y secuenciador de Sanger; software de asignación de alelos con la base de datos IPD-IMGT/HLA actualizada; centrífuga; freezer.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de tipificación por sondas o por secuenciación de cada locus con registro; kits de anticuerpos anti-HLA de antígeno único; sueros de control; células de donante para pruebas cruzadas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos con EDTA o ACD; hisopos bucales; placas; puntas libres de nucleasas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; microesferas; celdas de flujo; reactivos de secuenciación.

Unidad

1 · alelos HLA en nomenclatura oficial, a dos, cuatro o más campos · intensidad media de fluorescencia de los anticuerpos · % de anticuerpos reactivos contra el panel

Rango de referencia

Se tipifican al menos HLA-A, B, C, DRB1 y DQB1; la compatibilidad para médula no emparentada exige 10 de 10 o 8 de 8 alelos a resolución alélica; un anticuerpo donante-específico con intensidad media de fluorescencia mayor a 1.000 a 3.000 se considera relevante

Norma que lo exige

Ley 27.447 de trasplante de órganos, tejidos y células y las resoluciones del INCUCAI, que exigen la tipificación HLA para la inscripción en lista de espera y la donación, y que habilitan los laboratorios de histocompatibilidad; el Registro Nacional de Donantes de Células Progenitoras Hematopoyéticas del INCUCAI; Ley 26.529 de derechos del paciente; las normas de acreditación de laboratorios de histocompatibilidadnorma internacional

Norma que describe la técnica

Los estándares de la Federación Europea de Inmunogenética (EFI) y de la Sociedad Americana de Histocompatibilidad e Inmunogenética (ASHI) para los laboratorios de histocompatibilidad; la nomenclatura de los factores del sistema HLA de la OMS y la base IPD-IMGT/HLA; las instrucciones de uso de los kits registrados; ISO 15189; los programas de control de calidad externo de las asociacionesnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

Estándares EFI, versión 8.0 (2022); ASHI Standards (2023)

Volumen de muestra

5 a 10 mL de sangre con EDTA o ACD; hisopado bucal para donantes del registro; 2 a 5 mL de suero para anticuerpos, con muestras seriadas cada tres meses en lista de espera

Conservación y transporte

La sangre se conserva refrigerada hasta una semana para extraer ADN; para pruebas cruzadas con células se procesa dentro de las 24 a 48 horas. Los sueros de los pacientes en lista de espera se toman periódicamente y se guardan congelados en seroteca, porque los anticuerpos cambian y la prueba cruzada se hace con el suero más reciente y con los históricos. La identidad de la muestra se verifica con doble identificación y, en trasplante, con una segunda muestra independiente; un error de identidad en HLA es un rechazo. Las bases de alelos se actualizan trimestralmente.

Límite de detección típico

No aplica en tipificación; los anticuerpos se detectan desde intensidades de fluorescencia de 500 a 1.000 según el laboratorio

Incertidumbre típica

Concordancia mayor al 99 % entre laboratorios en los programas de control de calidad para la tipificación; la interpretación de anticuerpos de baja intensidad varía entre centros

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 9/9/2026