Transcriptos en aRN extraído

Fundamento

La cuantificación de transcriptos mide cuánto se está expresando un gen, no si está presente, que es una pregunta distinta de la del diagnóstico viral aunque la técnica sea la misma. Se parte del ARN mensajero, se lo convierte en ADN complementario con transcriptasa reversa y se amplifica por PCR en tiempo real. El resultado nunca es absoluto: se expresa como expresión relativa frente a genes de referencia de expresión constante, y la elección de esos genes normalizadores es la decisión que más afecta la conclusión. Se usa en investigación, en caracterización de cepas industriales y en el estudio de la respuesta de un cultivo a un tratamiento.

Analito (qué se busca)

transcriptos

Matriz (en qué muestra)

ARN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador de tiempo real; cabina de PCR; microcentrífuga refrigerada.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Master mix de un paso con transcriptasa reversa y polimerasa; cebadores y sondas; control de gen de referencia; inhibidor de ARNasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas ópticas; gradillas frías.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; placas.

Unidad

copias/mL

Rango de referencia

Según ensayo validado

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

10 a 100 ng de ARN por reacción

Conservación y transporte

Tubo con el ARN en agua libre de nucleasas, congelado a −70 °C. El ARN se degrada en minutos a temperatura ambiente: todo el manejo va en frío y con material libre de RNasas.

Límite de detección típico

10 copias por reacción

Incertidumbre típica

±20 a 30%: la transcripción reversa suma su propia variabilidad

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 5/10/2026

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