Variantes de carga por intercambio iónico, exclusión molecular y electroforesis capilar

Fundamento

Las formas con distinta carga se separan por cromatografía de intercambio catiónico con gradiente de sal o de pH, o por isoelectroenfoque capilar con imagen, que las resuelve por su punto isoeléctrico. El perfil se compara con el del producto de referencia.

Analito (qué se busca)

Variantes de carga

Matriz (en qué muestra)

Anticuerpos monoclonales y proteínas recombinantes; graneles y productos terminados en liberación; muestras de estudios de estabilidad y de estrés forzado; biosimilares en comparabilidad; formulaciones en desarrollo

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con detector ultravioleta y control de temperatura, con columnas de intercambio catiónico y de exclusión molecular; detector de dispersión de luz multiángulo; sistema de isoelectroenfoque capilar con imagen; sistema de electroforesis capilar con detección ultravioleta.

Proveedores de Biología molecular · Cromatografía líquida (HPLC/UPLC).

Reactivos¿Dónde lo compro?

Buffers de gradiente de sal y de pH; anfolitos y marcadores de punto isoeléctrico; patrones de calibración; producto de referencia.

Proveedores de Metrología y calibración.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Columnas de intercambio catiónico y de exclusión molecular dedicadas al producto; capilares recubiertos; viales de bajo enlace de proteínas; filtros de fase móvil.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Columnas; capilares; anfolitos; buffers y patrones.

Unidad

1 · % de especies ácidas, principal y básicas por intercambio catiónico o isoelectroenfoque capilar · % de monómero, de dímero y de agregados de orden superior por exclusión molecular · masa molar de cada pico confirmada por dispersión de luz (kDa) · % de especie intacta, de cadenas libres y de fragmentos por electroforesis capilar en condiciones reducidas y no reducidas · punto isoeléctrico aparente de cada especie

Rango de referencia

El criterio se fija como porcentaje de las especies ácidas, principales y básicas, y se sigue en estabilidad

Norma que lo exige

Las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre registro de medicamentos biológicos y biosimilares, que exigen el control de las variantes de carga y de tamaño en liberación y en estabilidad; las especificaciones aprobadas en el registro; las guías sobre evaluación de inmunogenicidad, que fundan el control de agregados; las normas de acreditación del laboratorionorma internacional

Norma que describe la técnica

La guía ICH Q6B, que fija el control de la heterogeneidad molecular; ICH Q5E sobre comparabilidad; ICH Q5C sobre estabilidad de productos biotecnológicos; el capítulo de la Farmacopea de los Estados Unidos sobre anticuerpos monoclonales y los métodos generales de cromatografía de exclusión y de electroforesis capilar; los métodos generales equivalentes de la Farmacopea Europea; ICH Q2 para la validaciónnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

ICH Q6B; ICH Q5E; ICH Q5C; capítulos de anticuerpos monoclonales y métodos generales de las farmacopeas vigentes

Volumen de muestra

De 100 a 500 µg de proteína para el conjunto de las tres determinaciones

Conservación y transporte

La muestra se conserva a la temperatura de su especificación y se evita el congelado y descongelado repetido, que genera agregados que no estaban. Se analiza sin filtrar salvo que el método lo indique, porque el filtro retiene agregados y baja artificialmente el resultado.

Límite de detección típico

Los agregados se cuantifican desde alrededor del 0,05 al 0,1 % del área total

Incertidumbre típica

Del 5 al 20 % relativo sobre las especies minoritarias

Área

Farmacéutico; Biología molecular; Química analítica

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 4009 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos