Variantes de tamaño por intercambio iónico, exclusión molecular y electroforesis capilar

Fundamento

Los agregados y los fragmentos se separan por cromatografía de exclusión molecular, mejor con detector de dispersión de luz multiángulo, que da la masa real de cada pico y evita confundir un agregado con una interacción con la columna; la electroforesis capilar con dodecilsulfato completa el cuadro para los fragmentos.

Analito (qué se busca)

Variantes de tamaño

Matriz (en qué muestra)

Anticuerpos monoclonales y proteínas recombinantes; graneles y productos terminados en liberación; muestras de estudios de estabilidad y de estrés forzado; biosimilares en comparabilidad; formulaciones en desarrollo

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con detector ultravioleta y control de temperatura, con columnas de intercambio catiónico y de exclusión molecular; detector de dispersión de luz multiángulo; sistema de isoelectroenfoque capilar con imagen; sistema de electroforesis capilar con detección ultravioleta.

Proveedores de Biología molecular · Cromatografía líquida (HPLC/UPLC).

Reactivos¿Dónde lo compro?

Fase móvil de exclusión molecular con la fuerza iónica validada; dodecilsulfato de sodio, agente reductor y patrones de masa molecular; patrones de calibración; producto de referencia.

Proveedores de Metrología y calibración.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Columnas de intercambio catiónico y de exclusión molecular dedicadas al producto; capilares recubiertos; viales de bajo enlace de proteínas; filtros de fase móvil.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Columnas; capilares; anfolitos; buffers y patrones.

Unidad

1 · % de especies ácidas, principal y básicas por intercambio catiónico o isoelectroenfoque capilar · % de monómero, de dímero y de agregados de orden superior por exclusión molecular · masa molar de cada pico confirmada por dispersión de luz (kDa) · % de especie intacta, de cadenas libres y de fragmentos por electroforesis capilar en condiciones reducidas y no reducidas · punto isoeléctrico aparente de cada especie

Rango de referencia

El porcentaje de agregados tiene límite estricto y es de los atributos que más se vigilan en estabilidad

Norma que lo exige

Las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre registro de medicamentos biológicos y biosimilares, que exigen el control de las variantes de carga y de tamaño en liberación y en estabilidad; las especificaciones aprobadas en el registro; las guías sobre evaluación de inmunogenicidad, que fundan el control de agregados; las normas de acreditación del laboratorionorma internacional

Norma que describe la técnica

La guía ICH Q6B, que fija el control de la heterogeneidad molecular; ICH Q5E sobre comparabilidad; ICH Q5C sobre estabilidad de productos biotecnológicos; el capítulo de la Farmacopea de los Estados Unidos sobre anticuerpos monoclonales y los métodos generales de cromatografía de exclusión y de electroforesis capilar; los métodos generales equivalentes de la Farmacopea Europea; ICH Q2 para la validaciónnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

ICH Q6B; ICH Q5E; ICH Q5C; capítulos de anticuerpos monoclonales y métodos generales de las farmacopeas vigentes

Volumen de muestra

De 100 a 500 µg de proteína para el conjunto de las tres determinaciones

Conservación y transporte

La muestra se conserva a la temperatura de su especificación y se evita el congelado y descongelado repetido, que genera agregados que no estaban. Se analiza sin filtrar salvo que el método lo indique, porque el filtro retiene agregados y baja artificialmente el resultado.

Límite de detección típico

Los agregados se cuantifican desde alrededor del 0,05 al 0,1 % del área total

Incertidumbre típica

Del 5 al 20 % relativo sobre las especies minoritarias

Área

Farmacéutico; Biología molecular; Química analítica

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 4010 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos