Variantes somáticas en BRAF en tejido tumoral por secuenciación

Fundamento

El tejido llega fijado en formol e incluido en parafina, y el patólogo marca en el corte el área con más células tumorales y estima su porcentaje, porque el ADN del tumor viene mezclado con el del tejido sano que lo rodea y esa proporción fija lo que el método puede detectar. Sobre el ADN extraído de esa zona se amplifica y se secuencia la región de interés, hoy casi siempre por secuenciación masiva en un panel que cubre varios genes a la vez, y el resultado se informa como variante detectada o no detectada junto con su frecuencia alélica, es decir qué proporción de las lecturas la llevan. BRAF está un escalón por debajo de RAS en la misma vía. Su variante más frecuente, V600E, cambia un solo aminoácido y deja la proteína activa sin necesidad de señal, y tiene inhibidores específicos que cambiaron el pronóstico del melanoma avanzado. El mismo resultado se lee distinto según el tumor: en melanoma indica tratamiento dirigido, en cáncer de colon marca un subgrupo de peor pronóstico y en carcinoma de tiroides ayuda a clasificar. Por eso el informe se interpreta siempre contra el diagnóstico anatomopatológico y no por sí solo.

Analito (qué se busca)

BRAF

Matriz (en qué muestra)

Tejido tumoral fijado en formol e incluido en parafina; biopsias; citologías; bloques de tumor; ADN tumoral

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microtomo y microscopio para la selección del área tumoral; extractor de ácidos nucleicos para parafina; fluorómetro; termociclador de PCR en tiempo real y equipo de PCR digital; secuenciador masivo de sobremesa; servidor y software de análisis de variantes; equipo de hibridación in situ y microscopio de fluorescencia.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de extracción de parafina; kits de mutaciones por PCR con registro; paneles de secuenciación de genes de cáncer; sondas de hibridación in situ; controles con mutaciones de frecuencia conocida; materiales de referencia certificados.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos; tubos libres de nucleasas; placas; chips o celdas de flujo del secuenciador.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; paneles; celdas de flujo; sondas; controles.

Unidad

1 · variante detectada o no detectada · % de frecuencia alélica (VAF) · nomenclatura HGVS de la variante

Norma que lo exige

Las guías de tratamiento oncológico del Instituto Nacional del Cáncer y las de las sociedades científicas; las obras sociales, las prepagas y el sistema de cobertura de medicamentos de alto costo, que exigen el resultado molecular para autorizar las terapias dirigidas; Ley 26.529 de derechos del paciente; los reactivos requieren registro ante la ANMAT; la Red Nacional de Laboratorios de Biología Molecular en Oncologíaargentina e internacional

Norma que describe la técnica

Las guías de la Asociación para la Patología Molecular, el Colegio Americano de Patólogos y la Asociación Internacional para el Estudio del Cáncer de Pulmón sobre pruebas moleculares en cáncer de pulmón; la guía conjunta de la AMP, ASCO y CAP para la interpretación y el informe de variantes somáticas (Li y colaboradores, 2017); las guías de la NCCN y la ESMO; ISO 15189 e ISO 20387 para los laboratorios; los programas de evaluación externa de la calidadargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

Guía AMP/ASCO/CAP (2017), vigente; ISO 20387:2018

Volumen de muestra

Bloque de parafina o 5 a 10 cortes de 5 a 10 micrones, con el corte teñido de referencia marcado por el patólogo; al menos 50 a 100 ng de ADN

Conservación y transporte

El tejido tiene que fijarse en formol tamponado entre 6 y 48 horas: la subfijación y la sobrefijación degradan el ADN, y los descalcificadores ácidos lo destruyen. Los cortes se hacen con cuchilla nueva para no arrastrar ADN de otro bloque. La muestra va con el informe de patología y el porcentaje de células tumorales; sin eso, un resultado negativo no se puede interpretar. Los resultados con variantes de significado incierto se informan como tales y se revisan cuando cambia la evidencia.

Límite de detección típico

1 a 5 % de frecuencia alélica según el método y la profundidad de secuenciación

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico; Farmacéutico

A esta ficha todavía le faltan datos: la incertidumbre típica. ¿Los sabés? Escribinos y la completamos.

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 4120 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos