Western blot (inmunotransferencia)

Fundamento

Las proteínas se separan por peso molecular en un gel de poliacrilamida con SDS, se transfieren electroforéticamente a una membrana y se revelan con un anticuerpo primario específico seguido de uno secundario marcado, que se detecta por quimioluminiscencia o color.

Analito (qué se mide)

Proteína específica

Matriz (en qué muestra)

Extracto celular / tejido

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cuba de electroforesis vertical; equipo de transferencia; agitador orbital; documentador de quimioluminiscencia.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Acrilamida-bisacrilamida; SDS; buffer de transferencia; membrana de PVDF o nitrocelulosa; leche descremada o BSA; anticuerpos primario y secundario; sustrato quimioluminiscente.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas de vidrio y peines; bandejas de incubación; pinzas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Membranas; papel de filtro; guantes.

Unidad

kDa (peso molecular) · Intensidad relativa de banda

Rango de referencia

Resolución útil de 10 a 250 kDa

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

20 a 50 µg de proteína por calle

Conservación y transporte

Extracto con inhibidores de proteasas, congelado a −70 °C. La membrana transferida se puede guardar seca o en buffer a 4 °C durante días.

Límite de detección típico

0,1 a 1 ng de la proteína buscada, según el anticuerpo

Incertidumbre típica

Semicuantitativo: ±20 a 30% en densitometría, y siempre relativo a un control de carga

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026