Determinación del contenido total de glucosinolatos en semillas de colza

Fundamento

Los glucosinolatos son compuestos azufrados propios de las crucíferas que, al romperse el tejido de la semilla, son hidrolizados por una enzima propia, la mirosinasa, y liberan isotiocianatos, nitrilos y tiocianatos. Esos productos son los responsables del sabor picante de la mostaza y, en cantidades altas, de efectos antinutricionales y bociógenos en los animales que consumen la harina desgrasada: interfieren con la captación de yodo por la tiroides y deprimen el consumo y la ganancia de peso. El mejoramiento genético de la colza produjo las variedades de bajo contenido, que es lo que se comercializa como canola y lo que define su valor; por eso el contenido de glucosinolatos es una especificación de compraventa y un criterio de clasificación varietal. La determinación se apoya en la cuantificación del azufre o de la glucosa liberados, o en la separación cromatográfica de los glucosinolatos individuales, según la variante. El paso crítico y común a todas es el primero: hay que inactivar la mirosinasa antes de que actúe, porque si se hidrolizan los glucosinolatos durante la molienda o la extracción, lo que se mide es lo que quedó y no lo que había. Eso se consigue extrayendo con metanol caliente, que desnaturaliza la enzima al mismo tiempo que disuelve los analitos. El extracto se purifica por intercambio iónico, y en el método cromatográfico se tratan los glucosinolatos retenidos con sulfatasa, que les quita el grupo sulfato y los convierte en desulfoglucosinolatos, separables por cromatografía líquida en fase reversa con detección ultravioleta; cada uno se cuantifica con su factor de respuesta relativo respecto de un patrón interno, en general sinigrina, y la suma da el total. El resultado se expresa en micromoles por gramo de semilla a humedad definida.

Analito (qué se busca)

Glucosinolatos totales e individuales

Matriz (en qué muestra)

Semillas de colza y de canola; harinas y expellers de colza destinados a alimentación animal; semillas de crucíferas; muestras de mejoramiento genético y de control de variedades; partidas en recepción de aceitera

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con detector ultravioleta de arreglo de diodos; molinillo de laboratorio; baño de agua o bloque calefactor para la extracción en caliente; columnas de intercambio iónico y sistema de elución; centrífuga; estufa para la determinación de humedad; balanza analítica.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Metanol; sulfatasa purificada; resina de intercambio iónico; patrón interno de sinigrina o de glucotropaeolina; patrones de glucosinolatos individuales cuando están disponibles; buffers de elución; agua ultrapura.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Columnas de purificación; viales; planilla con las áreas, los factores de respuesta relativos y el cálculo; determinación de humedad de la misma muestra para expresar sobre base definida; identificación de la variedad, del origen, de la campaña y del lote.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Solventes; enzima; resina; patrones; muestra.

Unidad

mol/kg · µmol de glucosinolatos totales por gramo de semilla a humedad definida · perfil de glucosinolatos individuales cuando se determina por cromatografía · humedad y contenido de aceite de la muestra · patrón interno empleado y factores de respuesta relativos · límite de la especificación de canola y dictamen · variedad y campaña

Rango de referencia

La propia semilla trae la enzima que destruye lo que se quiere medir: si la extracción no inactiva la mirosinasa desde el primer minuto, el resultado sale bajo y la partida pasa como canola sin serlo

Norma que lo exige

Las normas de comercialización de colza y canola, que fijan el contenido máximo de glucosinolatos para la denominación; la reglamentación sobre alimentos para animales y sus contaminantes y factores antinutricionales; los requisitos de registro y de inscripción de variedades; las normas de acreditación del laboratorionorma argentina

Norma que describe la técnica

IRAM 14824, Toxinas naturales en alimentos. Determinación del contenido total de glucosinolatos en semillas de colza. Método de rutina. La norma IRAM de toxinas naturales en alimentos que fija la determinación del contenido total de glucosinolatos en semillas de colza, con la inactivación de la mirosinasa, la extracción, la purificación y la cuantificación; las normas internacionales equivalentes de glucosinolatos en semillas oleaginosas; los procedimientos validados del laboratorionorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Norma IRAM de determinación del contenido total de glucosinolatos en semillas de colza

Volumen de muestra

De 2 a 10 g de semilla

Conservación y transporte

La semilla se conserva seca y entera hasta el ensayo, y se muele en el momento en presencia del solvente caliente o inmediatamente antes de extraer: una harina de colza molida y guardada pierde glucosinolatos de manera continua por acción de su propia enzima.

Límite de detección típico

Del orden de 0,5 µmol/g

Incertidumbre típica

Del 5 al 15 % relativo

Área

Alimentos y bebidas; Química analítica; Agronomía

Fecha de última actualización: 22/9/2026