Genotipado de SNP por discriminación alélica

Fundamento

Dos sondas marcadas con fluoróforos distintos compiten por hibridar con el sitio polimórfico; solo la perfectamente complementaria se hidroliza y emite señal, de modo que el patrón de fluorescencia identifica el genotipo como homocigota de uno u otro alelo o heterocigota.

Analito (qué se mide)

Variante puntual (SNP)

Matriz (en qué muestra)

ADN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador de tiempo real con lectura de punto final; cabina de PCR.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Ensayos de discriminación alélica con sondas específicas; master mix; controles de genotipo conocido.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas ópticas de 96 o 384 pocillos.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Placas; puntas con filtro.

Unidad

Genotipo · RFU por alelo

Rango de referencia

Se requieren controles de los tres genotipos

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

10 a 50 ng de ADN ya extraído, por reacción

Conservación y transporte

Tubo Eppendorf con el ADN en solución, congelado a −20 °C. Evitar congelar y descongelar muchas veces: fragmenta el ADN.

Límite de detección típico

No aplica: el resultado es el genotipo, no una concentración

Incertidumbre típica

La tasa de error de llamado es menor al 1% con buena calidad de ADN

Área

Biología molecular; Agronomía

Fecha de última actualización: 3/9/2026