Tocoferoles y tocotrienoles en aceites y alimentos grasos por cromatografía líquida

Fundamento

En aceites y grasas la muestra se disuelve directamente en el solvente de fase móvil y se inyecta, lo que evita pérdidas y es la vía preferida cuando la matriz es solo grasa. En alimentos con otras fracciones se hace saponificación en caliente con hidróxido de potasio en alcohol y en presencia de un antioxidante que proteja la vitamina, seguida de extracción con solvente del insaponificable, lavado, secado y concentración. El extracto se separa por cromatografía líquida, en fase normal con columna de sílice cuando se necesita resolver beta y gamma tocoferol, que en fase reversa coeluyen, y la detección se hace por fluorescencia con excitación y emisión en el ultravioleta, que es mucho más selectiva y sensible que la absorbancia, o por arreglo de diodos cuando las concentraciones son altas. Cada isómero se cuantifica contra su propio patrón, porque las respuestas difieren, y la actividad biológica se calcula como equivalentes de alfa tocoferol aplicando los factores convencionales. Como los tocoferoles se oxidan con facilidad, todo el procedimiento se hace al abrigo de la luz y con antioxidante agregado, y la recuperación se verifica en cada tanda por agregado conocido.

Analito (qué se mide)

Alfa, beta, gamma y delta tocoferol, tocotrienoles y actividad de vitamina E calculada

Matriz (en qué muestra)

Aceites vegetales crudos y refinados; aceite de germen de trigo y de girasol; grasas y margarinas; suplementos a base de aceites; alimentos enriquecidos con vitamina E; aceites de pescado estabilizados

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con detector de fluorescencia y de arreglo de diodos; equipo de saponificación con reflujo; evaporador rotatorio o concentrador con corriente de nitrógeno; centrífuga; balanza analítica; baño termostático.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Hexano, isopropanol, metanol y acetonitrilo de calidad cromatográfica; hidróxido de potasio; etanol; ácido ascórbico o pirogalol como antioxidante; sulfato de sodio anhidro; patrones de los cuatro tocoferoles y de tocotrienoles; nitrógeno de alta pureza.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Balones de saponificación; ampollas de decantación; matraces aforados ámbar; viales de inyección ámbar; filtros de membrana; columna de sílice o de fase reversa.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Solventes; viales y septos; filtros; guantes; nitrógeno; papel de aluminio.

Unidad

kg/kg · mg de cada tocoferol por kg de muestra · mg de alfa tocoferol equivalente por 100 g · perfil relativo de isómeros (%)

Rango de referencia

Los aceites vegetales tienen tocoferoles totales del orden de 300 a 1.200 mg por kg según la especie, con el girasol dominado por alfa tocoferol y la soja y el maíz por gamma; el rotulado nutricional se verifica contra el valor declarado con las tolerancias de la reglamentación

Norma que lo exige

El Código Alimentario Argentino, capítulo VII de alimentos grasos, capítulo V de rotulación en cuanto a la declaración de vitaminas y a las condiciones para usar expresiones como fuente de vitamina E, capítulo XVII de alimentos de régimen y capítulo XXII de suplementos dietarios; las normas de rotulado nutricional y sus tolerancias; las especificaciones de compra de aceites con tocoferoles declaradosargentina e internacional

Norma que describe la técnica

Las normas ISO de grasas y aceites para la determinación de tocoferoles y tocotrienoles por cromatografía líquida; las normas europeas y los métodos AOAC de determinación de vitamina E en alimentos; los métodos de la sociedad americana de químicos de aceites; la metodología analítica oficial del Código Alimentario Argentinoargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

Código Alimentario Argentino, capítulos V, VII, XVII, XXII y XX, texto vigente; normas ISO y métodos AOAC vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. De 0,1 a 1 g de aceite, o de 2 a 10 g de alimento, por determinación

Conservación y transporte

Se trabaja al abrigo de la luz, con vidrio ámbar y con antioxidante agregado desde el primer paso, porque los tocoferoles se pierden en horas si la muestra queda expuesta. Los extractos se guardan en frío, bajo atmósfera de nitrógeno y por poco tiempo. La muestra de aceite se conserva en frasco lleno al ras y cerrado; una muestra oxidada da tocoferoles bajos que se confunden con un producto que no los llevaba. La recuperación por agregado conocido se corre siempre, ya que es la única forma de saber si la saponificación destruyó parte del analito.

Límite de detección típico

Del orden de 0,5 a 2 mg por kg con detección por fluorescencia

Incertidumbre típica

Del orden del 10 al 15 % relativo, con la etapa de saponificación como fuente principal en matrices complejas

Área

Alimentos y bebidas; Química analítica

Fecha de última actualización: 10/9/2026