Vitamina A por saponificación y cromatografía líquida

Fundamento

La muestra se saponifica a reflujo con álcali alcohólico y antioxidante: ese paso libera las vitaminas de la grasa y de sus formas esterificadas, y el antioxidante evita que se destruyan durante el propio ensayo. Después se extraen con solvente, se concentran bajo nitrógeno y se separan por cromatografía líquida. Todo el procedimiento se hace en material ámbar y con luz atenuada.

Analito (qué se busca)

Vitamina A

Matriz (en qué muestra)

Alimentos fortificados; aceites; lácteos; suplementos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con detector de arreglo de diodos y de fluorescencia; equipo de saponificación a reflujo con manta calefactora; evaporador con corriente de nitrógeno; ampollas de decantación; centrífuga.

Proveedores de Centrífugas · Cromatografía líquida (HPLC/UPLC).

Reactivos¿Dónde lo compro?

Hidróxido de potasio y alcohol etílico; ácido ascórbico o pirogalol como antioxidante; éter de petróleo y hexano; patrón certificado de retinol y de sus ésteres; materiales de referencia.

Proveedores de Reactivos y solventes · Patrones y materiales de referencia.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Balones de reflujo; ampollas; viales ámbar; filtros.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Patrones, que se degradan y hay que reponer; solventes; columnas.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Unidad

mg/kg · UI/100 g · % del valor diario de referencia · µg/100 g o mg/100 g

Rango de referencia

Se informa como retinol o como equivalentes de actividad; el valor se compara con lo declarado y con el aporte de referencia

Norma que lo exige

Código Alimentario Argentino, artículos sobre alimentos fortificados; Ley 25.630 de prevención de anemias y malformaciones, que obliga a fortificar la harina de trigo; Código Alimentario Argentino, artículo 235 sexto (rotulado nutricional); Ley 27.642 de promoción de la alimentación saludable y su Decreto 151/2022, que definen los sellos de advertencia a partir de estos valoresargentina e internacional

Norma que describe la técnica

AOAC 992.04 y EN 12823-1, para la determinación de vitamina A en alimentos por cromatografía líquidaargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

EN 12823-1:2014 y EN 12822:2014, vigentes

Volumen de muestra

100 a 200 g de producto en su envase original

Conservación y transporte

Todo el trabajo se hace protegido de la luz y con antioxidante: el retinol se destruye en minutos bajo luz directa y la vitamina D isomeriza con el calor. Se usan viales ámbar o envueltos en aluminio, y la muestra se guarda refrigerada y en oscuridad desde que llega. Los patrones se controlan por absorbancia antes de cada curva, porque se degradan aun bien guardados.

Límite de detección típico

1 µg/100 g de retinol; 0,1 mg/100 g de tocoferol

Incertidumbre típica

±10 a 20%; la vitamina D es la más difícil por su baja concentración y su inestabilidad

Área

Alimentos y bebidas; Química analítica; Farmacéutico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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