Vitamina D por saponificación y cromatografía líquida

Fundamento

La muestra se saponifica en caliente con hidróxido de potasio alcohólico, lo que libera las vitaminas de los ésteres y destruye la matriz grasa, con antioxidante agregado para que no se degraden en el proceso. Las vitaminas se extraen con solvente apolar, se concentran y se separan por cromatografía líquida en fase normal o reversa, con detección ultravioleta para la A y la D y de fluorescencia para la E, que es mucho más sensible.

Analito (qué se busca)

vitamina D

Matriz (en qué muestra)

Alimentos fortificados; aceites; lácteos; suplementos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con detector de arreglo de diodos y de fluorescencia; equipo de saponificación a reflujo con manta calefactora; evaporador de nitrógeno; ampollas de decantación; campana de gases.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Hidróxido de potasio; alcohol etílico; ácido ascórbico o pirogalol como antioxidante; éter de petróleo y hexano; patrones certificados de retinol, colecalciferol y tocoferoles.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Balones de reflujo; ampollas; viales ámbar; filtros.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Patrones, que se degradan y hay que reponer; solventes; columnas.

Unidad

µg/100 g o mg/100 g · UI/100 g · % del valor diario de referencia

Rango de referencia

Esta ficha es la de las vitaminas liposolubles (A, D, E y K), y los valores de la ley 25.630 no le corresponden: esa ley fortifica la harina de trigo con hierro y con vitaminas del complejo B, que son hidrosolubles y se determinan por la técnica de la ficha de vitaminas hidrosolubles. Para las liposolubles, el valor de referencia depende del producto y de su rótulo: lo que se verifica es la declaración del envase y, cuando existe, el mínimo del alimento fortificado en el Código Alimentario. Hay que tomarlo del artículo que corresponda a cada producto y no de un valor único.

Norma que lo exige

Código Alimentario Argentino, artículos sobre alimentos fortificados; Ley 25.630 de prevención de anemias y malformaciones, que obliga a fortificar la harina de trigo; Código Alimentario Argentino, artículo 235 sexto (rotulado nutricional); Ley 27.642 de promoción de la alimentación saludable y su Decreto 151/2022, que definen los sellos de advertencia a partir de estos valoresargentina e internacional

Norma que describe la técnica

AOAC 992.04, 992.06 y 2001.13; EN 12823-1 (vitamina A), EN 12821 (vitamina D) y EN 12822 (vitamina E); ISO 20633argentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

EN 12823-1:2014 y EN 12822:2014, vigentes

Volumen de muestra

100 a 200 g de producto en su envase original

Conservación y transporte

Todo el trabajo se hace protegido de la luz y con antioxidante: el retinol se destruye en minutos bajo luz directa y la vitamina D isomeriza con el calor. Se usan viales ámbar o envueltos en aluminio, y la muestra se guarda refrigerada y en oscuridad desde que llega. Los patrones se controlan por absorbancia antes de cada curva, porque se degradan aun bien guardados.

Límite de detección típico

1 µg/100 g de retinol; 0,1 mg/100 g de tocoferol

Incertidumbre típica

±10 a 20%; la vitamina D es la más difícil por su baja concentración y su inestabilidad

Área

Alimentos y bebidas; Química analítica; Farmacéutico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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