Vitaminas hidrosolubles del complejo B y ácido fólico por cromatografía líquida

Fundamento

Las vitaminas se liberan de la matriz por hidrólisis ácida y enzimática, con fosfatasa o takadiastasa que rompen las formas fosforiladas y los poliglutamatos del folato. El extracto se limpia por fase sólida y se separa por cromatografía líquida en fase reversa. La tiamina se detecta por fluorescencia previa oxidación a tiocromo; la riboflavina fluoresce por sí sola; la niacina y el folato se detectan por ultravioleta o por masas.

Analito (qué se mide)

Vitaminas del complejo B y ácido fólico

Matriz (en qué muestra)

Harinas fortificadas; alimentos enriquecidos; suplementos; premezclas

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con detectores de fluorescencia y ultravioleta; autoclave o baño para la hidrólisis; estufa de incubación enzimática; equipo de extracción en fase sólida.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Ácido clorhídrico; acetato de sodio; enzimas takadiastasa y conjugasa; ferricianuro de potasio para el tiocromo; patrones certificados de tiamina, riboflavina, niacina, piridoxina, ácido fólico y cianocobalamina.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Viales ámbar; cartuchos de fase sólida; matraces; filtros.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Enzimas; patrones; columnas.

Unidad

mg/100 g o µg/100 g · mg/kg en harinas · % del valor diario de referencia

Rango de referencia

Harina de trigo fortificada según ley 25.630: 6,3 mg/kg de tiamina, 1,3 mg/kg de riboflavina, 13 mg/kg de niacina y 2,2 mg/kg de ácido fólico

Norma que lo exige

Ley 25.630 de fortificación obligatoria de la harina de trigo y su decreto reglamentario; Código Alimentario Argentino, capítulo de alimentos fortificados; Código Alimentario Argentino, artículo 235 sexto (rotulado nutricional); Ley 27.642 de promoción de la alimentación saludable y su Decreto 151/2022, que definen los sellos de advertencia a partir de estos valoresargentina e internacional

Norma que describe la técnica

AOAC 942.23 (tiamina), 970.65 (riboflavina), 944.13 (niacina) y 2004.05 (folato); EN 14122, EN 14152, EN 15652 y EN 14131; ISO 20635argentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

EN 14122:2014 y EN 14131:2003, vigentes

Volumen de muestra

250 g de harina o producto, tomados de un mismo lote y bien homogeneizados

Conservación y transporte

La homogeneización es crítica en harinas fortificadas: la premezcla de vitaminas se agrega en el molino y si no se dispersó bien, dos alícuotas del mismo bolsón dan resultados que difieren al doble. Se cuartea bien antes de tomar la alícuota. La muestra se guarda seca, fría y en oscuridad, porque la riboflavina se destruye con la luz y el folato se oxida.

Límite de detección típico

0,01 mg/100 g

Incertidumbre típica

±10 a 15%; el ácido fólico es el más variable por la eficiencia de la desconjugación enzimática

Área

Alimentos y bebidas; Química analítica; Farmacéutico

Fecha de última actualización: 8/9/2026