Biomasa adherida en laboratorio y evaluación de la eficacia de desinfectantes y de tratamientos de remoción

Fundamento

Se deja crecer el biofilm sobre cupones del mismo material y acabado de la planta, en un reactor con flujo y temperatura controlados, y se mide la biomasa total adherida: por tinción con cristal violeta en el método de microplaca, o por observación al microscopio confocal, que además muestra el espesor y la estructura.

Analito (qué se busca)

Biomasa adherida

Matriz (en qué muestra)

Superficies de acero inoxidable, polímeros y elastómeros de plantas de alimentos, farmacéuticas y de agua; cañerías y torres de enfriamiento; dispositivos médicos; membranas

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Reactores de biofilm de disco rotatorio o de tipo CDC con control de flujo y temperatura; dispositivo de biofilm en placa de 96 pines; lector de microplacas; baño de ultrasonido; microscopio confocal o de epifluorescencia; luminómetro de ATP; incubadoras; cabina de seguridad biológica.

Proveedores de Baños, agitación y homogeneización · Microscopía.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Cepas de referencia; medios de cultivo diluidos que favorecen la adhesión; cristal violeta; marcadores de viabilidad fluorescentes; neutralizantes validados.

Proveedores de Cultivo y microbiología.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cupones de acero inoxidable, de polímeros y de elastómeros con el acabado real de la planta; placas de microtitulación; hisopos; tubos.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Cupones; medios; reactivos de tinción y de ATP; placas.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Unidad

1/m³ · unidades formadoras de colonias por cm2 · reducción logarítmica decimal · unidades relativas de luz de ATP · absorbancia de cristal violeta

Rango de referencia

Se informa como absorbancia o como espesor; lo que importa es la comparación entre tratamientos, no el valor absoluto

Norma que lo exige

Los sistemas de gestión de inocuidad alimentaria y los planes de limpieza y desinfección que exige el Código Alimentario Argentino y el SENASA en los establecimientos habilitados; la Disposición ANMAT 3827/2018 en cuanto a la validación de los procedimientos de limpieza; las normas de agua de proceso y de sistemas de enfriamiento; los requisitos de las auditorías de clientes y de las certificaciones privadasargentina e internacional

Norma que describe la técnica

ASTM E2562 para el reactor de disco rotatorio y ASTM E2871 para la evaluación de desinfectantes sobre biofilm en ese reactor; ASTM E2196 y E2647 para otros reactores; ASTM E2799 para el método de microplaca de alto rendimiento; EN 13697 para la actividad bactericida en superficieargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

ASTM E2562-22; ASTM E2871-21; EN 13697:2015+A1:2019

Volumen de muestra

Cupones de 1 a 4 cm2 por condición, con al menos tres réplicas y controles sin tratar en cada corrida

Conservación y transporte

El biofilm de laboratorio tiene que parecerse al de la planta: se usan las cepas aisladas del propio establecimiento cuando el objetivo es resolver un problema concreto, el mismo material y acabado de superficie, y condiciones de nutrientes pobres, que son las reales. La neutralización del desinfectante al final se valida siempre. La recuperación del biofilm del cupón por raspado y sonicación se estandariza, porque es la mayor fuente de variabilidad. Los resultados de laboratorio se verifican después en planta con hisopados y ATP antes y después del ciclo de limpieza.

Límite de detección típico

10 a 100 unidades formadoras de colonias por cm2 según el método de recuperación

Incertidumbre típica

±0,5 unidades logarítmicas entre réplicas, que es alto y por eso los criterios se fijan en varias unidades logarítmicas

Área

Microbiología; Alimentos y bebidas; Materiales/industrial

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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