Tipificación molecular por electroforesis en campo pulsado (PFGE)

Fundamento

Las bacterias se embeben en bloques de agarosa y se lisan sin romper el ADN cromosómico. Ese ADN se corta con una enzima de restricción de corte poco frecuente y los fragmentos grandes se separan aplicando campos eléctricos que cambian de dirección periódicamente; el patrón de bandas resultante es la huella de la cepa.

Analito (qué se mide)

Relación clonal entre aislamientos

Matriz (en qué muestra)

Cultivo puro bacteriano

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Sistema de electroforesis de campo pulsado con recirculador refrigerado; transiluminador; software de análisis de patrones.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Agarosa de bajo punto de fusión; enzimas de restricción (XbaI, SpeI); proteinasa K; marcador de peso molecular de cepa de referencia.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Moldes de bloques; cubas; tubos; guantes.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Agarosa; enzimas; reactivos.

Unidad

Patrón de bandas · % de similitud · Dendrograma de coeficiente de Dice

Rango de referencia

Aislamientos indistinguibles: 100% de similitud. Estrechamente relacionados: ≥95%

Norma que describe la técnica

Protocolos PulseNet International; ANLIS Malbrán

Edición y vigencia de la norma

Protocolos PulseNet, vigentes

Volumen de muestra

Un cultivo puro fresco de 18 a 24 horas por aislamiento

Conservación y transporte

Los aislamientos viajan en medio de transporte o en placa sellada, a temperatura ambiente, y se procesan dentro de las 48 horas. Es imprescindible que sean cultivos puros: una contaminación agrega bandas y el patrón deja de ser interpretable. Cada corrida incluye la cepa de referencia como marcador.

Límite de detección típico

Resuelve fragmentos de 20 a 800 kilobases

Incertidumbre típica

La comparación entre laboratorios exige protocolo idéntico y la misma cepa de referencia

Área

Microbiología; Biología molecular

Fecha de última actualización: 8/9/2026