Verificación de la población y de la resistencia de bioindicadores para esterilizadores por vapor

Fundamento

La esterilización por vapor no se puede verificar midiendo el producto final, porque el ensayo de esterilidad sobre una muestra no detecta niveles bajos de supervivencia. Lo que se hace, en cambio, es desafiar al proceso con una población conocida de microorganismos de resistencia conocida y comprobar que los destruye: ese es el papel del bioindicador, que contiene esporas de Geobacillus stearothermophilus, la especie más resistente al calor húmedo. Toda la validación del autoclave descansa en que ese indicador sea lo que dice ser, y por eso sus características se verifican en recepción o en un laboratorio de referencia. La determinación de la población consiste en recuperar las esporas del soporte, diluirlas y sembrarlas en medio de cultivo, incubando a la temperatura óptima de la especie y contando las colonias: el resultado debe coincidir con la población declarada dentro de la tolerancia que fija la norma, porque un indicador con menos esporas de las declaradas es un desafío más débil y puede dar negativo en un autoclave que no esteriliza. La determinación de la resistencia es más elaborada y se expresa mediante el valor D, que es el tiempo de exposición a una temperatura dada necesario para reducir la población a la décima parte: se exponen varios bioindicadores a tiempos crecientes en un equipo de resistometría que entrega condiciones de vapor exactamente controladas, mucho más precisas que las de un autoclave de producción, se cultivan y se cuenta la fracción de supervivientes; del ajuste de la curva de supervivencia sale el valor D. Se determinan además el tiempo de supervivencia mínimo y el tiempo de muerte máximo, que son los que la norma exige declarar y los que el usuario emplea para interpretar sus ciclos.

Analito (qué se busca)

Esporas viables de Geobacillus stearothermophilus

Matriz (en qué muestra)

Bioindicadores para esterilizadores por vapor: tiras de esporas, ampollas autocontenidas y suspensiones; lotes de bioindicadores en recepción de central de esterilización; indicadores en verificación de población y de resistencia

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Equipo de resistometría con control preciso de temperatura, presión y tiempo de exposición al vapor; estufas de cultivo a la temperatura de la especie; cabina de seguridad biológica; baño de agua; contador de colonias; autoclave para la preparación de medios; micropipetas; homogeneizador para la recuperación de esporas del soporte.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Medios de cultivo adecuados para la recuperación y el recuento, con su control de calidad; diluyentes estériles; cepa de referencia de Geobacillus stearothermophilus para el control del método.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Bioindicadores del lote según el plan de muestreo; planilla con el recuento por unidad y con la fracción de supervivientes por tiempo de exposición; curva de supervivencia y cálculo del valor D; identificación del fabricante, del lote, de la población y del valor D declarados y de la fecha de vencimiento.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Bioindicadores; medios de cultivo; vapor y energía.

Unidad

1/m³ · población de esporas viables por unidad (UFC) y valor declarado · valor D a la temperatura de referencia (min) · tiempo de supervivencia mínimo y tiempo de muerte máximo (min) · curva de supervivencia y su ajuste · pureza del cultivo verificada · fecha de vencimiento y condiciones de conservación del lote

Rango de referencia

Un bioindicador con menos esporas de las declaradas da negativo en un autoclave que no esteriliza: la validación sale bien y el instrumental sale contaminado

Norma que lo exige

La reglamentación de productos médicos y de establecimientos de salud sobre validación y control de los procesos de esterilización; las normas de esterilización por vapor y de indicadores biológicos; los procedimientos de la central de esterilización y sus registros; los pliegos de compra hospitalarios; las normas de acreditación del laboratorionorma argentina

Norma que describe la técnica

IRAM 37007-4, Esterilizadores por vapor. Bioindicadores. Conceptos, requisitos y análisis. La norma IRAM de esterilizadores por vapor sobre bioindicadores, que fija los conceptos, los requisitos y los análisis, con la determinación de la población, del valor D y de los tiempos de supervivencia y de muerte; las normas internacionales de indicadores biológicos para esterilización; los procedimientos del laboratorionorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Norma IRAM de esterilizadores por vapor, parte de bioindicadores: conceptos, requisitos y análisis

Volumen de muestra

Varias unidades del lote por determinación

Conservación y transporte

Los bioindicadores se conservan a la temperatura y la humedad que indica el fabricante y al abrigo de la luz: la resistencia de las esporas cae si el producto se guarda mal, y un lote vencido o mal conservado subestima el desafío al proceso.

Límite de detección típico

El recuento en placa resuelve desde algunas unidades formadoras de colonia por indicador

Incertidumbre típica

Del 10 al 30 % sobre la población y del 10 al 20 % sobre el valor D

Área

Microbiología; Clínico/bioquímico; Farmacéutico

Fecha de última actualización: 22/9/2026